实验八、九微生物大小的测定和显微镜直接计数法重点.ppt

微生物学实验 生物技术系 陈 敏 微生物大小的测定 显微镜直接计数法 一、微生物大小的测定 实验目的 学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法，增强微生物细胞大小的感性认识 实验原理 微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物的大小需要在显微镜下借助测微尺来测定 不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，测量时，先用已知刻度的镜台测微尺进行校正，算出在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。最后根据微生物细胞占目镜测微尺的格数，计算出细胞的实际大小。 实验器材 1）菌种：酵母菌 2）仪器：目镜测微尺、镜台测微尺、载玻 片、盖玻片、显微镜等 实验步骤 校正：低倍镜观察 镜台测微尺刻度居中 目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行 两尺在某一区域内两线完全重合 算出两重合线内镜台测微尺与目镜测微尺所占的格数 取下镜台测微尺，换上细菌（或酵母菌）染色制片，在油镜下测定细菌大小，高倍镜下测定酵母菌大小 一般选用对数生长期菌体来代表该菌的大小，可选择有代表性的10个左右细胞进行测定 实验结果 将在不同倍数物镜下，目镜测微尺的校正结果填入书上表格中。将各菌测定结果填入书上表格中。 二、显微镜直接计数法 实验目的 了解血细胞计数板计数的原理；掌握血细胞计数板进行微生物计数的方法 实验原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特殊的具有确定面积和容积的计菌板上，在显微镜下直接计数的方法 血细胞计数板的构造 血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网上刻有 9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。大方格的长和宽各为1mm，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm,其体积为0.1mm3 ，即10－4ml 用25 ×16规格的计数板计数时，通常数5个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均数，再乘上25。(要从两个计数室中计得平均数) 设5个中方格的总菌数是A，菌液稀释倍数为B 实验器材 1）菌种：酵母菌 2）仪器：血细胞计数板、显微镜、盖玻片 滴管 实验步骤 1）制备菌悬液 2）镜检计数器 3）加样品：在清洁干燥的计数板上盖上盖玻片，用滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片的边缘滴1滴，菌液靠毛细渗透作用自动进入计数室 4）显微镜计数：加样后静止5min，在显微镜下计数。从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量 5）清洗计数器 实验结果 将计数结果写在书上表格中 * * 实验四 1）装目镜测微尺 2）校正目镜测微尺 3）菌体大小测定 a.放镜台测微尺 b.校正 c.计算 实验步骤 两重合线间镜台测微尺格数×10 μm 目镜测微尺每格长度 = 两重合线间目镜测微尺格数 计算： 实验步骤 计数室的刻度有两种规格，一种是16×25，另一种是25×16，两种的小方格都是400个 1ml菌液中的总菌数=A/5 ×25 × 10 4 ×B =50000A ×B 加样品