实验室常用试剂配制重点.doc

实验室常用试剂、缓冲液的配制方法蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法核酸、蛋白质杂交用相关试剂、缓冲液的配制方法  SDS分离胶配方表 PAGE凝胶配方表（核酸电泳用） 各种缓冲液的性质对照表 离心机转子的转速与相对离心力RCF(g)间的换算关系相对离心力RCF值（g值）取决于转子的转速（rpm）和旋转半径（r，以mm计算)，可用如下公式表示： 此外，根据RCF值（g值)、rpm值、r值之间的关系，可从图A、图B中大致读出各种数值。 图A 高速转子的相对离心力列线图 要确定某一列上的未知值时，用尺子排列其他两列的已知值，所需值落在尺子与第三列的交切处。 如：转子速度为80,000 rpm，旋转半径为20 mm时，相对离心力RCF值约为150,000 g。 图B 低速转子的相对离心力列线图 要确定某一列上的未知值时，用尺子排列其他两列的已知值，所需值落在尺子与第三列的交切处。 如：转子速度为5,000 rpm，旋转半径为40 mm时，相对离心力RCF值约为1,100 g。密码子表 色素在聚丙烯酰胺凝胶中的移动速度*大肠杆菌的基因型 野生的大肠杆菌（E.coli）的基因组DNA中有470万个碱基对（bp)，内含4288个基因。E.coli基因组中还包含有许多插入序列，如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的，由此表明了基因组具有它的可塑造性。利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基因发生突变或缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型 (Phenotype)，把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型（Genotype)。具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。这些不同基因型特性的菌株在基因工程的研究和生产中具有广泛的应用价值。 大肠杆菌基因型的表示方法有如下几种： 1．根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成三个斜体字母来表示。 例如：DNA Adenine Methylase→dam。 2．变异基因不同，导致的结果相同时，用其作用结果的英文名称的前三个字母斜体后加上一个大写字母来表示区别。 例如：Recombination→recA、recB、recC。 3．某个基因或某个领域缺失时，在其基因型前面加上“?”表示。 例如：lac-proAB基因缺失时它的基因型表示为?(lac-proAB)。 4．野生的大肠杆菌具有F因子（质粒）和噬菌体插入片段，当这些质粒或噬菌体片段变异或缺失时，用“( )”或“/”等以区别。 例如：/F [traD36、proAB、lac I q、lacZ?M15]。 5．由于某种基因的变异导致大肠杆菌可以明显观察到特征变化，有时也用其表现型代替基因型进行表示。 例如：某些抗药性的获得或丧失，用如下方式表示：Streptomycin抗性→Str +或Str r，Ampicillin敏感性→Amp-。 (第一个字母要大写,“+”或“r”表示有抗性,“-”表示无抗性或敏感)。 6．根据某些特异性蛋白的变异及其导致的结果变化进行表示。 例如：TH2菌株上有一种基因型表示如下：hsdS20 (rB-、mB-)，其中S20代表特异性识别蛋白发生变异，()中的 rB-、mB-表示由于S20的变异而导致B株来源的hsdR和hsdM的功能缺失。使用时注意： 基因工程中，经常使用的大肠杆菌几乎都来自于K-12菌株，最近也经常使用由B株及C株来源的大肠杆菌。 大肠杆菌B株原来就为lon-，另外MV1184株不具有琥珀抑制基因 (Amber supperssor free)，由于这些都是原始菌株所不具备的基因，因此不在基因型中加以表示，要注意。主要的基因型说明 基因重组相关的基因型 recA (Recombination) Map position: 58 min 功能：recA基因表达ATP依赖型DNA重组酶，它在λ-噬菌体与基因组DNA的溶原重组时起作用，同时具有对DNA 放射性损伤的修复功能。由recA基因的变异所产生的基因型使同源或异源DNA的重组不能进行，保持插入DNA的稳定性，对DNA的转化有利。 recB (Recombination) Map position: 61 min 功能：recB基因表达ATP依赖型DNase和核酸外切酶V的一个亚基，对recA的DNA重组酶起辅助和促进作用。DNase 催化双链DNA的解旋和解链，核酸外切酶V催化单链DNA的裂解，在DNA的重组和损伤修复中发挥重要作用。recB基因的变异导致其DNA重组和修复功能丧失，保证了外源DNA的稳定，有利于DNA转化。 recC (Recombination) Map pos