实验四传代细胞培养与病毒感染力的滴定重点.ppt

表达绿荧光蛋白的IBRS-2细胞 在青霉素瓶或离心管中将病毒作连续10倍的稀释，从10-1-10-8。 将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8 孔，每孔接种100μl。 在每孔加入细胞悬液100μl，使细胞量达到2-3×105个/ml。 设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。（100μl生长液+100μl细胞悬液） 逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。 结果的计算，Reed-Muench两氏法or Karber法 九、TCID50的计算方法 病毒液 出现 无CPE 累 计 出现CPE孔 稀释度 CPE孔数 孔数 CPE孔数 无CPE孔数 所占的% 10-1 8 0 27 0 100（27/27） 10-2 8 0 19 0 100（19/19） 10-3 7 1 11 1 91.6 （11/12） 10-4 3 5 4 6 40（4/10） 10-5 1 7 1 13 0.7（1/14） 10-6 0 8 0 21 0（0/21） 10-7 0 8 0 29 0（0/29） 10-8 0 8 0 37 0（0/37）? 距离比例＝（高于50%病变率的百分数-50%）/（高于50%病变率的百分数-低于50%病变率的百分数） ? ＝（91.6-50）/（91.6-40） ＝0.8 lgTCID50=距离比例×稀释度对数之间的差+高于50%病变率的稀释度的对数 =0.8×(-1)+(-3) =-3.8 TCID50=10-3.8／0.1ml 含义：将该病毒稀释103.8倍接种96孔细胞培养板，每孔100μl，可使50%接种孔的细胞发生病变。 2、Karber法 病毒液稀释度 出现CPE的孔数 出现CPE孔的比率 10-1 8 8/8=1 10-2 8 8/8=1 10-3 7 7/8=0.875 10-4 3 3/8=0.375 10-5 1 1/8=0.125 10-6 0 0/8=0 10-7