实验五微生物培养基配制与灭菌重点.ppt

3. 按钮压至第一段 (不可压至最底) 4. 深入液面下 2 ~ 4 mm 无菌操作 – 取菌技巧 4 5. 慢慢释放按钮，即可 吸取液体 无菌操作 – 取菌技巧 4 1. 试管前端过火 2. 打开试管盖 无菌操作 – 接菌技巧 方法一：以接种环沾菌，放入新的培养基中接菌 方法三：以Pipetman 吸取菌液，按钮压至最底排出菌液 方法二：以安全吸球吸取菌液，放入新的培养基中，向下排出菌液 无菌操作 – 接菌技巧 操作时离火源遥远 试管直放，空气中菌体容易掉入 无菌操作 – 错误示范 无菌操作 – 错误示范 安全吸球倒放，菌液容易流入吸球内 安全吸球随意放置桌面，菌液容易流出至桌上 无菌操作 – 错误示范 Pipetman 倒放，菌液容易流入 Pipetman 内 注意事项 – 生物性废弃物 生物性废弃物放至正确位置以便灭菌 二、微生物的接种与分离技术 （一）、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 １、接种工具和方法 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 常用的接种方法有以下几种： １）划线接种 ２）三点接种 ３）穿刺接种 ４）浇混接种 (二)、分离纯化 １、倾注平板法 ２、涂布平板法 倾注平板法（a）涂布平板法（b）图解 1.菌悬液 2.熔化的培养基 3.培养物 4.无菌水 ３、平板划线法 平板划线分离法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法 平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。 2、划线方法 　　稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀 放入杀菌锅 (Autoclave) 灭菌 培养基配制 – 灭菌 加水盖过铁板 放东西 关门 调整温度时间 关紧泄压阀 注意事项 – 杀菌锅的使用 注意事项 – 杀菌釜使用 灭菌结束后，等压力降回零时才可打开门 进入杀菌釜 之物品，盖子不可关太紧或太松 注意事项 – 杀菌釜使用 拿灭菌后物品请记得带耐热手套 培养基配制 – 平板培养基 灭过菌之固态培养基于无菌操作台 (Laminar flow)内倒制平板培养基 (Plate) 日光灯 UV灯 风扇 培养基和玻璃器材的灭菌方法 培养基和玻璃器材的灭菌方法 间歇灭菌法： 待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在370C恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成营养体，以便下次蒸煮时杀灭。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 过滤除菌法： 不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 紫外线灭菌法： 一般30W灯管，9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时先喷洒石炭酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。 培养基和玻璃器材的灭菌方法 本次实验报告内容 记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。 思考题 固体培养基加琼脂的作用是什么？ 干热灭菌和高压蒸汽灭菌和有何不同？ 培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌的培养基如何进行无菌检查? 实验五第二节微生物检验的基本操作技术 主要内容 无菌技术 M的接种与分离技术 微生物的培养方法 微生物的生长现象与观察 （一）什么是无菌技术 　　指在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施。 （二）无菌环境 无菌室 无菌柜 超净工作台 1