实验一培养基的制备消毒灭菌重点.ppt

实验一 培养基的制备和消毒灭菌 实验目的 1 了解培养基配制原理，学习并掌握培养基制备方法。 2 学习微生物实验的一些准备方法（灭菌培养皿的准备、灭菌吸管的准备、无菌水的准备、培养基平板和斜面的准备等），为后续实验做准备。 3 了解消毒与灭菌应用范围及基本原理，学习并掌握实验室常用消毒与灭菌的方法 二 基本原理 1 培养基制备的原则 2 消毒与灭菌的原理 培养基的概念 根据微生物生长的营养需求，人工配制的混 合营养基质。 必需的养分 适合的环境 不同类的微生物一般采用不同的培养基。 牛肉膏蛋白胨培养基——细菌专用 马铃薯糖培养基——真菌专用 高氏一号培养基——放线菌专用 1 培养基的制备原则 培养基的分类 （2）按照培养基的用途差异分 基础培养基： 加富培养基： 选择培养基： 鉴别培养基 （1）按存在的物理状态分 液体培养基（不含凝固剂） 半固体培养基（凝固剂琼脂含0.2--0.5%） 固体培养基（凝固剂琼脂含1.5--2.0%）。 （3） 按组成成分分 培养基的作用：微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。 天然培养基 合成培养基 半合成培养基 琼脂的特性： 成分是多缩半乳糖，绝大多数微生物不能分解利用。 96℃溶解，42~45℃凝固。 对微生物生长没有毒害作用。 培养基配制原则 选择适宜的营养物质 营养物质浓度及配比合适 控制pH条件 控制氧化还原电位 原料来源的选择 根据培养目的不同调配 灭菌处理 ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ 2 消毒和灭菌的原理 ★消毒与灭菌是确保微生物纯培养（由一个菌体生长繁殖的群体）的最基本的实验技术。 ★灭菌是应用理化方法杀灭物体上所有微生物。 ★消毒是应用理化方法杀灭物体上部分微生物（主要是病原微生物）。 灭菌与消毒的方法可分为 物理法：高温灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌 化学法：化学药剂杀菌 高温灭菌 干热灭菌 湿热灭菌 ◆ ◆ 1）火焰灭菌：酒精灯、接种环 2）干燥热空气箱灭菌：干燥热空气箱 160-170℃,2小时（利用热空气灭菌 ) 干热灭菌(dry heat sterilization) 适用范围：金属器皿、玻璃器皿 湿热灭菌(moist heat sterilization) 利用饱和热蒸汽灭菌。 高压蒸汽灭菌锅采用高压蒸汽灭菌法 是湿热灭菌的一种。利用水的沸点随水蒸气 压力的增加而上升以达到高温灭菌目的的方法。 a 方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2） 20-30min。 b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。 c 注意事项：灭菌开始排净冷空气； 灭菌终了，自然缓慢降压回零； 灭菌结束，趁热取出物品。 高压蒸汽灭菌锅 三 实验操作步骤 分组操作：分6组，5人1组。 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（第1~2组做，每组600ml） 马铃薯糖琼脂培养基（第3~4组做，400ml） 高氏1号培养基（第5~6组做，200ml） ◆ ◆ ◆ 牛肉膏蛋白胨培养基（用于腐生细菌的培养） 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 20g 水 1000ml pH 7.0--7.2 ①　称量： ②　溶化：电炉加热熔化 ③　调节pH： 7.0--7.2 ④　分装：试管20支/组，余三角瓶，塞棉塞 ⑤　包扎：双层纸和绳子。 ⑥　灭菌：高压蒸汽灭菌。 培养基组成（1000ml） ◆ 配置方法 ◆ 马铃薯糖培养基（通常用于培养真菌） ??? 配制方法： ①　称量：注意马铃薯去皮后切成丝称量。 ②　溶化：将马铃薯丝放入水中置于电炉上加热并不断搅拌，煮沸5—10min，用多层纱布过滤得滤液，在滤液中加入其他药品，不断搅拌直至完全溶解。补足水分。 ③　分装：20支/组，余三角瓶。 ④　包扎： ⑤　灭菌： ??马铃薯 200 g 葡萄糖或蔗糖 20 g 琼脂 2