实验一小鼠实验技术重点.ppt

实验一 小鼠基本实验技术和各种检验标本的采集 首都医科大学实验动物部 首都医科大学基础医学院实验动物学系 孙 泉 四次实验课安排 小鼠的基本实验技术和各种检验标本的采集技术（第3周，3月19日） 大鼠的基本实验技术和各种检验标本的采集技术（第4周，3月26日） 大鼠阻塞性黄疸及急性胰腺炎模型的制作（第5周，4月2日） 兔的基本实验技术和静脉插管技术（第6周，4月9日） 考核方式 出勤；20% 实验操作情况；30% 实验报告：实验目的；实验器材；实验内容；总结；50% 注意事项 注意安全：抓取；注射器等。 上课纪律：按时上课，穿实验服，保持安静。 保持卫生：每次课安排4个同学打扫卫生，动物尸体放入尸体房。 分组情况：1305教室:18人；1306教室:18人 一.实验目的 掌握小鼠的抓取和固定 掌握小鼠的编号与标记方法 掌握小鼠的常用给药方法 掌握小鼠的常用麻醉方法 掌握小鼠的安死术 掌握小鼠的采血方法 了解小鼠的采尿、粪的方法 了解小鼠各种脏器标本的采集方法 二.操作内容 分组：两人一组，每组小鼠2只，♀♂各1只。 品系：ICR 1.小鼠的抓取和固定 单手固定：肌肉、腹腔、灌胃 双手固定：肥胖或妊娠小鼠；双人配合 固定器：尾静脉注射与采血； 固定板：外科手术或解剖； 2.小鼠的性别鉴定及称重 将小鼠抓取后，放在烧杯中，称量体重，记录体重。 辨别雌雄 根据排泄孔和生殖孔的距离辨别。 距离近的为雌性 距离远的为雄性 3.小鼠的编号与标记方法 染色法： ①一般用于短期实验； ②常用的染液有3%-5%的苦味酸溶液（黄色）、0.5%的中性品红溶液（红色）； ③逆毛流方向涂上有色斑点； ④编号的原则是“从上到下，从左到右” 一种颜色代表十位，另一种颜色代表个位，这样可标记到99号 穿耳孔法： 用动物专用耳孔器在动物耳朵的不同部位打一小孔或打成缺口来表示一定号码的方法。 左耳代表十位，右耳代表个位。这种方法可标记100只左右的动物。 4.小鼠的常用给药方法 尾静脉注射 小鼠：0.05ml/10g体重～0.1ml/10g体重 ①放入固定器，露出尾部， 准备好注射液； ②酒精擦拭尾部； ③左手食指托住尾部下方，拇指配合，右手持注射器 ④针尖轻轻抬起与血管平行刺入，轻推药液 ⑤血管由红变白；用干棉球按住注射点，将针头拨出，用力按压止血。 皮下注射： ①俯卧固定；颈背部皮肤；左手拇指和食指捏住皮肤提起，右手持针沿纵轴方向刺入皮下； ②进针时感觉有阻力，继续刺入，突然阻力消失，活动针头 皮内注射： ①与皮肤平行刺入捏住的皮肤； ②注射时感觉阻力很大，并且手指有膨胀，注射部位局部形成皮丘，注射毕，为避免药液流出，停留片刻，再将针头拨出 腹腔注射： ①仰面保定； ②腹正中线左右两侧，与腹股沟平行的部位，用酒精棉球消毒 ③右手持针，30-45°角刺入不要太深，把针尖向上挑起皮肤和肌肉，证明未刺入内脏，回抽无血，即可注入药液。 灌胃法： ①先将动物保定，身体成一条直线； ②灌胃针头的前端放进动物口腔，顺着上腭插入咽部 ③先少量注入药液，如果小鼠无强烈挣扎，证明未插入气管 肌肉注射：注射针穿过皮肤至肌肉，回抽无血，即可注射药液 5.小鼠的常用麻醉方法 抓取、称重 将小鼠抓取后，放在烧杯中，称量体重，记录体重。 计算麻醉药用量 记录给药、进入兴奋期、麻醉期的时间。 呼吸麻醉 （了解） 小鼠常用麻醉药的剂量及注射途径 动 物 给药途径 盐酸氯胺酮 戊巴比妥 硫喷妥钠 水合氯醛 小鼠 i.v i.P i.m 22～44 35 50 25 50 400 单位：mg/kg i.v－静脉注射；i.p－腹腔注射；i.m－肌肉注射 观察麻醉期 ①全身麻醉的第一期（随意兴奋期）： 出现运动和运动失调； ②全身麻醉的第二期（不随意兴奋期）： 是由意识完全丧失至深而规则的自动呼吸开始时止。 ③全身麻醉的第三期（外科麻醉期）： 角膜反射由迟钝渐趋消失，翻正反射消失，疼痛反射消失， ④全身麻醉的第四期 （延髓麻痹期）： 进入此期，麻醉已严重过量，故临床上严禁出现此期。 尾尖采血法； 眼眶静脉丛采血法； 心脏采血法； 6.小鼠的常用的采血方法 7. 小鼠的采尿、粪的方法 代谢笼 少量采集：在抓取固定时受到刺激排出少量尿液和粪便 长期大量采集：使用代谢笼 8.安死术 1.颈椎脱臼法用左手按住动物的头部于实验台上，右手抓住尾根部，快速、不间断地向后、略向上使劲拉，以致脊椎脱臼，脊髓与脑干断离而死亡。2.过量麻醉法 给动物注射正常麻醉3～4倍的药量。3.空气栓塞法 向动物的静脉注射2～3mL左右的空气。 9. 小