3.2月季花药培养.ppt

花中皇后月季又称“月月红”，自然花期5至11月，开花连续不断 ，通常扦插就可以成活。 知识回顾 单倍体育种的过程？ 花药离体培养（N） 单倍体植株（N） 秋水仙素处理，使染色体翻倍 植株（2N） 特点：1 明显缩短育种年限 2 后代植株都为纯合子。 正常植株（2N） 花的结构 花托 花萼 花瓣 雄蕊 花药 花丝 雌蕊 柱头 花柱 子房 花丝 花药：囊状结构，内有很多花粉 （一）被子植物的花粉发育 1 雄蕊 一、基础知识 2 花粉的概念:由花粉母细胞经过减数分裂形成的单倍体的生殖细胞. 被子植物花粉的发育过程 小孢子母细胞 减数分裂 4个小孢子 (小孢子四分体时期) 小孢子(单核居中期) 小孢子(单核靠边期) 小孢子 生殖细胞核+花粉管细胞核 有丝分裂 （花粉粒的双核期） 生殖细胞将再进行一次有丝分裂，形成两个精子 1、关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（ ） A、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的 B、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果 C、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段 D、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央 BD 注：花粉母细胞经减数分裂形成4个单核花粉粒，每个花粉粒的细胞核进行一次有丝分裂形成1个花粉管细胞核和1个生殖细胞核，每个生殖细胞核再进行一次有丝分裂生成2个精子。 （二）产生花粉植株的两种途径 ① ② 移栽 花药中的花粉 胚状体 脱分化 愈伤组织 花药中的花粉 脱分化 分化 丛芽 再分化 丛芽 诱导 生根 体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似 原因：培养基中的激素种类及浓度配比 通过胚状体途径形成小植株 烟草花药培养 胚状体发育途径 部分花药产生胚状体 愈伤组织转接种到再生培养基 愈伤组织分化形成再生植株 水稻花药培养 愈伤组织发育途径 部分花药产生愈伤组织 接种在平板上的水稻花药 1、材料的选择 不同植物的诱导成功率不同. 同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响. （一般选月季的 ） 合适的花粉发育期（ ） 为什么？ 2、培养基的组成（ MS培养基+不同比例的植物生长调节激素） 此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等 (三)、影响花药培养的主要因素 初花期 单核居中期与靠边期之间 实验操作 一、材料的选取 二、材料的消毒 三、接种和培养 （一）材料选取 2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。 方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。 1、从花看：月季的初花期 从花药，花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的 月季花药培养时的花粉粒最好是（ ） A、四分体时期 B、二核或三核花粉粒 C、单核期 D、任何时期都可以 C （二）材料的消毒 5、无菌水冲洗3～5次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态 1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） （三）接种和培养 1 灭菌后花蕾，要在 下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。 3 通常每瓶接种花药 ，温度控制在 左右， 。幼小植株形成后才 。 2 在剥离花药时，要尽量 （否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底 ，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。 4 进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变化 无菌条件 不损伤花药 去除花丝 7-10个 25℃ 不需要光照 需要光照 主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的