Chapter-5transcription转录.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * A. phalloides?蕈 Saccharomyces cerevisiae?酿酒酵母 * * * * * * * * * * * * * * * * * miRNA的合成及加工过程 miRNA有两种基本作用模式： 在植物中，miRNA与靶序列精确或近乎精确互补，指导mRNA的断裂和靶序列的分解； 在动物中，大多数miRNA和mRNA序列不是很精确互补，它们通过一种未知的机制抑制蛋白质的合成。 动物中 植物中 5.3 siRNA 和 RNAi RNAi：与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA分子(double-stranded RNA，dsRNA)导入细胞时，该mRNA发生特异性的降解，导致基因表达的沉默。这个过程叫RNAi（RNA interference，RNA干扰）。 siRNA：当双链RNA进入细胞后，经酶切后会形成很多小片段，21-25nt，称为siRNA，是RNA干扰的引发物。这些小片段一旦与信使RNA(mRNA)中的同源序列互补结合，会导致mRNA降解，即不能翻译产生蛋白质，也就是使基因“沉默”了。 siRNA的作用方式（RNAi）： 1. 双链RNA在Dicer酶的作用下被裂解成siRNA 2. SiRNA的双链和某些蛋白形成复合物并解开变成单链 3. 此复合物同与siRNA互补的mRNA结合，使mRNA被RNA酶裂解。 miRNA and siRNA Application of RNAi RNAi的应用： Study gene’s function 研究基因功能； Therapy for disease 用于疾病治疗； Cure of AIDs by RNAi 通过RNAi途径治疗艾滋病 Thanks for your attention! * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 4.1 逆转录与逆转录酶的发现 4.2 逆转录病毒 4.4 逆转录 4.3 逆转录酶 4.5 逆转录病毒的生活周期 4.6 逆转录原理的应用－RT-PCR 4.1 Discovery of reverse transcription reverse transcriptase 逆转录与逆转录酶的发现 4.1 Discovery of reverse transcription reverse transcriptase 逆转录和逆转录酶的发现 实验现象： 1964年，Temin等首次发现： DNA合成抑制剂可以遏制鸟类肉瘤病毒ASV等RNA肿瘤病毒所造成的感染 在RNA肿瘤病毒的RNA复制过程中需要合成DNA。 另一个发现： ASV子代病毒颗粒的产生被放线菌素D所抑制 说明转录对于RNA肿瘤病毒增殖可能是必须的。 Hypothesis ： DNA是RNA肿瘤病毒在复制和致癌过程中的中间物 这一过程大致为：RNA肿瘤病毒－DNA原病毒（或前病毒）－RNA肿瘤病毒。 Confirmation ： In 1970, Temin Baltimore discovered reverse transcriptase respectively in RNA tumor virus . Temin 和 Baltimore分别在RNA肿瘤病毒中发现了逆转录酶。 Howard Temin and David Baltimore 于1975年荣获诺贝尔生理与医学奖。 4.2 Retrovirus（逆转录病毒）： 含逆转录酶的RNA病毒称为逆转录病毒。 1. Definition： 逆转录病毒基因组由两条相同的正链RNA分子组成，每个约8,500nt，其5?端有cap，3?端有ployA尾。 2. 逆转录病毒的基因组： 4.3 Reverse transcriptase（逆转录酶） 是RNA指导的DNA聚合酶。具有三种酶活性 RNA指导的DNA聚合酶活性 DNA指导的DNA聚合酶活性 RNase H的活性 逆转录酶 逆转录中合成DNA的方向：5?－3? 引物为逆转录病毒包装时从宿主细胞获得的tRNA分子。 逆转录酶合成DNA需