卫生微生物实习指导.doc

卫生微生物学实验指导 （仅供预防医学本科教学使用） 姓 名 年 级 班 级 指导老师 实验一 自来水中指示微生物的检测 — 菌落总数的测定 目的及意义 掌握菌落总数实验的基本原理和意义；熟悉水样采集要求，熟悉菌落总数实验的全部过程和具体操作方法；了解无菌操作和避免污染的概念。 根据不同目的，选择有代表性的一种或一类微生物，对检测、研究对象中的该微生物状态进行定性或定量的描述，并赋予其特定的标志意义，这类微生物即所谓的指示微生物。指示微生物在污水与饮用水处理、环境监测、产品质量控制、消毒灭菌、卫生监督等领域广泛应用。最常用的为菌落总数和大肠菌群，菌落总数用于评价被检测样品的一般卫生微生物学质量，即微生物污染程度和安全性。 菌落总数是指被检测样品在单位重量（g）、溶剂（ml）、表面积（cm2）或体积（m3）内，所含有的能在某种培养基上经过一定条件培养后生长的微生物菌落总数。 仪器设备和试剂 仪器设备 电子天平、pH计、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台。 器材和试剂 100-1000μl移液器、1000μl吸头、广口旋塞试剂瓶、培养平皿；1.5%硫代硫酸钠溶液、营养琼脂。 样品来源 内蒙古医科大学金山校区C座自来水 实验准备 配置1.5%硫代硫酸钠溶液 取400μl 1.5%硫代硫酸钠溶液加入容积为250 ml的蓝盖试剂瓶中，该瓶作为为取样瓶（硫代硫酸钠的作用是中和自来水中的消毒剂）。 准备3个洗干净的培养平皿，用报纸包严。 配置80ml固体营养琼脂。 将上述取样瓶、营养琼脂和培养平皿101.3kPa高压蒸汽灭菌20分钟。 灭菌过程中将超净工作台或无菌室打开紫外灯照射30min。 样品采集 1.先对欲采集样品的水龙头进行消毒，然后将水龙头完全打开，放水5分钟后收集样品，采水量为瓶容量的80%左右。 2.采样后及时做好标记，开始检测。四、检测步骤 1.将水样用力摇20～25次，使微生物充分的分散开来。 2.分别稀释水样10倍、100倍、1000倍与水样原液一起待检。 3.取两个干净无菌的空平皿，分别标注“1”和“2”。在1号平皿中加入1ml水样后倾注15～20ml已熔化并冷却45℃左右的营养琼脂，并立即旋转平皿使水样与琼脂充分混匀（顺时针旋转3次、逆时针旋转3次、左右前后各晃3次，注意动作不可太大，避免损失），然后将平皿放在水平面上待凝，同样的方法制备2号平皿。再取一个干净无菌的空平皿，只倾注营养琼脂做空白对照。 3.待平皿内培养基冷却凝固后翻转平皿，使底面向上，37℃培养48小时后取出，计数平皿内的菌落数目。 结果分析 分别计数1号平皿和2号平皿里的菌落总数，取平均菌落数即为1ml水样中的菌落总数，并参考表1-1、1-2判断该水样是否符合微生物限量标准。 组 别： 检测水样的稀释度： 1号平皿菌落总数： 2号平皿菌落总数： 该自来水中每毫升可检出的菌落总数是多少？请给出计算步骤。 讨论 利用本实验方法是否可测得水中的全部细菌？本方法为什么主要是检测细菌菌落数，而不是霉菌或酵母菌？ 菌落总数主要是作为判定受检水样污染程度的标志，以便对水质进行卫生学评价时提供依据。能否根据菌落数多少判断被检样品致病性强弱？如果改变培养基成分、培养时间或培养温度，菌落数或菌落种类是否也随之改变？表1-1 一般水源水中菌落总数与水清洁程度的关系 水的类别 菌落总数（CFU/ml） 最清洁水 10～100 清洁水 100～1000 不太清洁水 1000～10 000 不清洁水 10 000～100 000 极不清洁水 100 000 表1-2 我国颁布的有关饮用水的微生物限量标准 项目 GB5749-1985 GB8537-1995 GB17324-2003 GB5749-2006 菌落总数（CFU/ml） 100 50 20 100 大肠菌群（CFU/100ml） 30 0 3 不得检