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时间分辨荧光分析(TRF) 是一种非同位素分析技术，它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰。 5.4 邻近闪烁分析技术（SPA) SPA 技术主要采用一种键合有受体分子的荧光微球, 当同位素标记的配体与受体分子结合时, 放射性同位素分子与荧光微球之间的距离足够近, 此时放射性同位素发射出的β粒子能够激发微球发射荧光,而游离的同位素标记配体与荧光微球距离较远, 不能激发荧光, 因此无需分离游离的和结合的标记配体, 只要通过检测筛选系统的荧光强度变化就可以实现受体的亲和力筛选. 5.5 光学传感器技术 鉴于光学标记检测技术存在着一些固有的缺陷,近年来具有非标记检测特征的光学传感器技术迅速成为筛选检测技术研究中的“宠儿”. 目前应用于药物筛选的光学传感器多是通过包被在传感器件敏感膜表面的生物识别分子, 与筛选分子特异性结合时引起传感器件的光电物理特性（如光强, 折射率或电阻等）的变化, 再通过适当的换能器转换为检测信号, 从而定性、定量地检测样品的作用情况. 6、高通量筛选装置 高通量筛选装置模型主要有: 孔板式微型反应器、 微流控式芯片实验室、 基于现有摇瓶和发酵罐原型缩写的微型反应器。 7、发酵培养基的优化 生物表型是生物固有遗传特性和生长环境相互作用的结果,要想使工程菌种表现出优异的生产性能,发酵条件的优化尤其重要。 培养基优化是是发酵工艺优化过程中的重要环节。 培养基的组成和配比合适与否，对生产菌株的生长繁殖、目的产物的发酵效价、发酵产物后续提炼工艺及最终产品的质量和纯度都将产生相当大的影响。 培养基优化方法 单因子实验基于所考察的各个因子之间不存在交互作用的假设而开展,把各个因子看作独立的自变量。 均匀设计法(Uniform Design)是将数论的原理和多元统计相结合的一种多因素优化方法。 正交试验设计(Orthogonal experimental design)是研究多因素水平的一种设计方法,根据正交性从全因子试验中挑选出部分有代表性的点进行试验,这些有代表性的点具备了 “均匀分散,齐整可比”的特点,正交设计是一种高效率、快速、经济的实验设计方法,在很多领域得到应用。 RecA重组系统是大肠杆菌内源性的同源重组体系, * FRT重组位点 * * 需要针对不同的酶反应设计特殊的底物，或利用酶的特 殊功能， * 3.2 高通量筛选方法 3.2.1 体内筛选方法 根据蛋白质功能与细胞表型之间的关联关系来进行筛选。 营养缺陷型菌株筛选法 一般要经过诱变、抗生素淘汰野生型、缺陷型菌株的检出和鉴定等步骤。 由于营养缺陷型菌株只有在添加了特别成分的培养基中才能生长，因此可以用来对合成这种成分的酶或者合成途径进行高通量筛选。 酵母双杂交 其利用酵母的转录调控机制来进行筛选。 例如，将两个功能域的编码基因分别接上不同的蛋白质编码序列，一个是已知蛋白质序列，另一个是未知、待筛选蛋白质序列，构建成融合表达载体。当两个蛋白质能相互作用时，可重组成有活性的转录激活子，开启受其调控的启动子表达下游的报告基因，通过报告基因的表达可筛选出能和已知蛋白相互作用的蛋白质。 当两种蛋白质之间的相互作用是由小分子化合物所介导时，酵母双杂交体系被拓展为酵母三杂交体系，该体系可用于筛选蛋白质与小分子化合物之间的相互作用。 转录调控因子筛选法 调控蛋白是结合特定的DNA 调控序列，通过控制基因开启和关闭来调节基因转录的蛋白。 调控蛋白通常与特定小分子化合物结合后发生构象变化，从而改变其与相应DNA 调控序列的亲和力，激活或者阻遏该启动子下游基因的转录。当酶催化生成的小分子化合物可以诱导特定调控蛋白使之启动下游报告基因的转录和表达时，该调控蛋白可以用作该小分子化合物的信号分子，将该化合物在细胞内的浓度与报告基因的表达强度关联起来。 Riboswitch （生物核糖开关）筛选法 核糖开关指的是mRNA一些非编码区的序列折叠成一定的构象，这些构象的改变应答于体内的一些代谢分子，从而通过这些构象的改变达到调节mRNA转录的目的。 这些核糖开关可将相应小分子化合物在细胞内的浓度用报告基因的表达强度呈现出来。 细胞内荧光标记筛选法 荧光标记是首选的高通量筛选标记，因为它可以用流式细胞分选仪进行筛选。 可用荧光标记底物、产物或者酶的筛选方法用于定向进化。 荧光共振能量转移 两个荧光基团，一个基团 (供体) 的发射光谱和另一个基团 (受体)的激发光谱有重叠部分，当它们的空间距离缩小(＜10 nm) 时，供体基团激发的能量被受体基团吸收，使得供体的荧光强度减小而受体的荧光强度增强。 3.