月季的组织培养.ppt

月季的组织培养 方案讲演 目 录 1、外植体的选择 2、外植体的清洗与消毒 3、接种与培养 4、继代增殖 5、壮苗培养与生根 6、总结 外植体很小时，有利于培养脱毒的植株。对月季的杉树坏疽环斑病毒可通过茎尖培养的方式达到脱毒的目的，如果单纯为了快速繁殖，可用大的茎尖或茎段进行离体培养，这时外植体的大小决定了茎尖的成活比例。 一般说外植体愈大，成活率愈高，成苗时间愈短。茎尖在1～10mm 长短时，对形成多芽苗最有效，不但多芽苗所占百分率高，而且每个茎段的侧枝数也比较多。外植体的大小同时影响外植体自身的发育和月季组培苗茎的增殖，外植体的长度在9.0～10.0mm，直径在3.0～3.5mm范围时，茎的增殖和发育是最好的。 外植体的选择 外植体的取材部位对芽的萌发也有影响，“Gold Glow”和“Improved fire”月季的侧芽如果在不同激素的培养基上进行组培，可发现在枝条顶部和基部的芽发育慢，而枝条中部的芽发育快。在研究中发现靠近外植体顶端的芽较其他部位芽的发育慢，在茎尖脱毒培养时，由嫩茎的顶芽得到的外植体成活率高于腋芽。在实际工作中由于顶芽数量少，故月季的组培依旧常常使用腋芽作为外植体，这时一般需要进行茎切除顶芽（摘心）以打破顶端优势、促使腋芽健壮生长，以促进嫩茎的增殖。 此外，外植体的取材时间及培养所需时间对月季嫩茎的发育和增殖也有影响。对于“Bulgarian rose”而言，选取外植体的最佳时间是冬季（1～3月），而“Improved fire”月季的培养时间以28d继代一次较好，超过 28d，茎的数目就不再增加了。 采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗手刷沾浓洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗干净，放置在小木板上，用利刀切成2-3cm/段，每段至少一个侧芽， 无菌条件下用70%酒精表面消毒30-40s，再用0.1%HgCl2溶液灭菌5-10min，最后用无菌水冲洗3-5次。 外植体的清洗与消毒 接种操作的程序： 1.接种室的消毒 2.器皿器具灭菌 3.材料的分离、切取和接种 垂直接种和斜向上45度接种是最佳的接种方式，腋芽再生芽数较多，且生长健壮，可能与植物的生长极性有关。 接种与培养 接种过程中的污染 ： 1.细菌性污染 主要症状：培养材料附近出现粘液状和发酵泡沫状 物体。 接种三五天可发现。 原 因：外植体带菌、培养基灭菌不彻底、操作 手法不当。 2.真菌性污染 ：一般是指霉菌引起的污染 原 因：接种室内的空气不清洁、超净工作台的 过滤效果不理想。 诱导培养基以MS为基本培养基（硝酸盐、钾和铵的含量高），附加适量的细胞分裂素6-卞氨基嘌呤（6-BA）0.5-3.0mg/L和生长素萘乙酸（NAA）0.01-1.0mg/L,且培养基中添加蔗糖有增加丛生芽数量的作用。 壮苗培养与生根 1、壮苗培养 在继代培养过程中，细胞分裂素浓度的增加有助于增殖系数的提高。但伴随着增殖系数的提高，增殖的芽往往出现生长势减弱，不定芽短小、细弱，无法进行生根培养的现象；即使能够生根，移栽成活率也不高，必须经过壮苗培养。壮苗培养时，可将生长较好的芽分成单株培养，而将一些尚未成型的芽分成几个芽丛培养。 通过选择适宜的细胞分裂素和生长素的种类及不同浓度配比，可以同时满足增殖和壮苗的不同要求。高浓度的生长素和低浓度的细胞分裂素的组合有利于形成壮苗。因此，在以丛生芽方式进行增殖时，适当降低培养基中BA等细胞分裂素的浓度，并增加NAA等生长素的浓度，就能达到壮苗培养的目的。在实际生产中，我们一般用较低浓度的细胞分裂素与生长素组成合理的比列，将有效增殖系数控制在3.0-5.0，以实现增殖和壮苗的双重目的。 2、生根培养 将成丛的试管苗分离成单苗，转接到生根培养基上，在培养容器内诱导生根的方法。试管苗生根的优劣主要体现在根系质量（粗度、长度）和根系数量（条数）吸收方面。不仅要求不定根比较粗壮，更重要的是要有较多的毛细根，以扩大根系的吸收面积，增