牛分枝杆菌系统进化及鉴定-欧喜超资料.pptx

1;结核分枝杆菌复合物(或群) ; 1882年，德国科学家Koch发现结核病的病原菌结核分枝杆菌， 1898年， Smith通过 培养特征的差异将结核分枝杆菌和牛分枝杆菌区分开来。 ;牛结核病; 2003年，广东检验检疫总局从美国进境的142头良种奶牛中，检出19例患有 结核病，打破了美国25年来没有牛结核病的说法； 20世纪50年代我国出现了牛结核病的大暴发，1955年检出阳性率达36.4％， 以后由于采取有效措施使结核病阳性率大大降低并控制在较低水平； 1985年和1987年，我国两次全国奶牛抽样调查结果显示，牛结核病的患病率 分别为5.83%和5.43%； 2007-2008年，对来自东北和西北六个牧场，1067头PPD阳性牛鼻拭子分离鉴 定发现，人型结核分枝杆菌感染率为2.72%（29/1067），牛分枝杆菌感染率 为1.31%（14/1067）。 ; 19世纪末20世纪初，发达国家中牛分枝杆菌感染占全部结核患者的25%，20 世纪末感染比例降至0.5%-7.2%； 1990-2003年，英国每年有17-50例患者感染牛分枝杆菌，占全部培养阳性患者 的0.5%-1.5%； 2005-2007年，武汉市结核病医院的回顾性调查发现，该院人感染牛分枝杆菌 的患病率为0.34%（17/5011）； 2010-2011年，新疆喀什胸科医院313例培养阳性患者菌株分离鉴定发现牛分 枝杆菌感染患者1例，占全部患者的0.32%（1/313）。 ;牛分枝杆菌在复合群菌株进化中的位置; 1998年,首次完成了人结核分枝杆菌H37Rv全基因组序列图，牛结核杆 菌的全基因组序列于2003年完成，牛分枝杆菌全基因组序列较结核分枝杆菌小得多。;在牛分枝杆菌和肺结核分枝杆菌H37Rv间存在着2437个单核苷酸多态性（SNPs），与肺结核分枝杆菌CDC1551间存在着2423个单核苷酸多态性SNPs。 在核苷酸水平上，牛分枝杆菌与结核分枝杆菌基因组相比，其同源性大干99.95％，表现出共线性，没有广泛的置换、复制或倒置现象。 ; 采用比较特定基因方法发现，结核分枝杆菌复合群各种菌株存在基因数目可变区。结核分枝杆菌基因组中的一些片段在牛分枝杆菌或卡介苗(BCG)基因组中缺失，这些缺失片段被称为差异区(region of differences，RD区) 。 利用杂交实验检测到16个差异区(RD1—16)，大小???2～12.7kb之间。卡介苗巴斯德株缺失这些RD区，但结核分枝杆菌H37Rv存在RD区，结核分枝杆菌H37Rv相关缺失区l-5(RvD1-5)以及TbD1在结核分枝杆菌H37Rv中均存在缺失。 大片段序列多态性分析（LSP）发现，某些缺失区仅存在于特定的复合群亚种内，推测缺失区与复合群各成员的系统进化存在一定联系。;牛分枝杆菌在结核分枝杆菌复合群系统进化中的位置;(M. Coscolla, 2014);;人和牛结核杆菌编码细胞壁和分泌蛋白的基因序列变异比较;牛结核分枝杆菌菌种鉴定;病案分析;2002年，在患者居住的农场，一只屠宰的病牛肺组织上发现结核分枝杆菌，流行病学调查发现上述患者也在同一时间因结核病离世。基因分型结果显示两株分枝杆菌具有相同的基因型。;牛分枝杆菌传统鉴定方法;牛分枝杆菌分子生物学鉴定;牛分枝杆菌分子生物学鉴定;Lanes: 1. 16S rRNA; 2. Rv0577 (MTBC); 3. IS1561(RDmic); 4. Rv1510 (RD4); 5. Rv1970 (RD7); 6. Rv3877/8 (RD1); 7. Rv3120 (RD12,RDcan).;根据牛结核分枝杆菌特异的单核苷酸多态性（SNP）进行鉴定；;复合群不同亚种，gyrA、katG、pncA、 oxyR、hsp65和gyrB基因单核苷酸突变位点。 ;GenoType? MTBC; Spoligotyping基因分型;耐药基线调查菌株牛分枝杆菌分离鉴定（2007-2009）;小结;28