毒理学实验指导一、二.docVIP

《食品毒理学》实验指导 综合实验 （四氯化碳）对肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT) 的影响实验 实验一 半衰期的测定-比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期 实验二 血液红细胞、白细胞计数 *所需实验仪器：电子天平、pH计（试纸）、显微镜、分光光度计、灌胃针头、（小）/（大）离心机、注射器。 实验一 半衰期的测定-比色法测定水杨酸钠的血浆半衰期 一、原理、目的 药物血浆半衰期t1/2即血浆药物浓度下降一半所需的时间。绝大多数药物是按一级动力学规律消除（恒比消除），因此每种药物都有固定的t1/2，不因血浆浓度高低而改变。本实验用分光光度法测定水杨酸钠的血浆浓度并计算t1/2。水杨酸钠为抗炎药，经肝代谢，在酸性环境中与三氯化铁生成一种紫色的络合物，在520nm波长下比色，其光密度与水杨酸浓度成正比。 通过测定水杨酸钠的血浆半衰期，使学生了解水杨酸钠在体内的消除速度，并掌握其血浆半衰期的测定方法。半衰期是判断毒物蓄积程度的重要参数，对中毒和解毒有一定的实践意义。 二、试剂、器材及动物 离心管、试管、磅秤、玻璃棒、注射器、吸管、离心机、721型分光光度计；三氯醋酸、水杨酸钠、三氯化铁；兔。 三、方法步骤 1、取离心管和试管各5支，分别标为1~5号，备用。5支离心管各加入10％三氯醋酸7ml。 2、取兔1只，称体重，从耳静脉取血2ml置入1号离心管，用玻璃棒搅拌。然而自耳静脉注入10%水杨酸钠 (剂量为150mg/kg)，并立即和60min后两次自另一耳静脉取血2ml，分别注入2、3号离心管中，搅拌。4、5号离心管分别加入蒸馏水和0.02%水杨酸钠2ml。 3、取上述5支离心管进行离心 (2 000r/min，5min)，准确吸取上清液6ml放入编号相对应的试管中，分别滴入10%三氯化铁12滴(0.6m1)摇匀5min后比色。 4、用721型分光光度计510nm波长比色，以4号管调“0”，读得5号管光密度为x，再以1号管调“0”，读得2号管为x1，3号管为x2，将上述操作归纳为下表： 水杨酸钠血浆半衰期的测定 试管名 编号 三氯醋酸 （ml） 兔血 （ml） 0.02%水杨酸钠 （ml） 蒸馏水 （ml） 离心上清液 （ml） 三氯化铁 （gtt） 对照 1 7 2 — — 6 12 立即 2 7 2 — — 6 12 60min 3 7 2 — — 6 12 空白 4 7 — — 2 6 12 标准 5 7 — 2 — 6 12 5、计算半衰期 ① 求k值：k=y/x; y=0.02 ② 求水杨酸钠血浓度：给药后立即血浓度y1=kx l；给药后60min血浓度y2=kx2 。 ③ 根据下列公式求半衰期： t1/2 = 四、结果 结果测定 5号管光密度（x） 2号管光密度（x1） 3号管光密度（x2） t1/2 实验二 血液红细胞、白细胞计数 A【红细胞计数】 红细胞计数（red blood cell count，RBC）是指计算每升血液内所含红细胞的数目。红细胞计数的方法有显微镜计数法、血沉管计数法、光电比色法、血细胞电子计数器计数法等。目前在临床上使用最广泛的是显微镜计数法（计数板法）。 原理 血液经稀释后，充入血细胞计数板，用显微镜观察，计数一定容积内的红细胞数并换算成每μl内的数目。 器材 改良式血细胞计数板：临床上最常用的是改良纽巴（Neubauer）氏计数板，它是由一块特制的玻璃板构成，玻璃板中间有横沟将其分为三个狭窄的平台，两边的平台较中间的平台高0.1mm。中央平台又有一纵沟相隔，其上各刻有一个计数室。每个计数室划分为9个大方格，每一大方格面积为1.0mm2，深度为0.1mm；四角每一大方格划分为16个中方格，为计数白细胞用。中央一大方格用双线划分为25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格，共计400个小方格，此为红细胞计数之用。血盖片：专用于计数板的盖玻片呈长方形，厚度为0.4mm。 沙利氏（shali）吸血管或红细胞稀释管，5ml吸管、中试管。 显微镜，计数器等。 稀释液：0.85％氯化钠溶液。 三、方法 试管稀释法 用5ml吸管吸取红细胞稀释液3.98ml（或4ml亦可）置于试管中。用沙利氏吸血管吸取全血样品至20μl刻度处（或吸血至刻度10处，红细胞稀释液用2ml）。擦去吸管外壁多余的血液，将此血液吹入试管底部，再吸、吹数次，以洗出沙利氏管内粘附的血细胞，然后试管口加塞，颠倒混合数次，再用毛细吸管（或玻棒）吸取已稀释好的血液，放于计数室与盖玻片接触处，即可自然流入计数室中。注意充液不可过多或过少，过多则溢出而流入两侧槽内，过少则计数池中形成气泡，致使无法计数。计数时，先用低倍镜，光线要稍暗些，找到计数室的