感染性疾病实验室诊断概要.ppt

病毒学诊断 常用鉴定试验： 中和实验 血凝抑制实验 virus 红细胞凝集抑制（HI）试验 原理： 病毒 病毒（特异性抗体） + + 红细胞 红细胞 凝集 不凝集 血凝现象 血凝抑制现象 Confocal image showing a macrophage in the lung of a mouse infected with SARS-corona virus. Double immunofluorescence labels the macrophage in red with antibodies against Mac-2 and viral protein in green with antibodies against spike. （三）真菌的分离培养 －常用培养基 沙保（Sabourud）培养基 真菌的菌落有两种：酵母型菌落和丝状菌落 酵母型菌落 丝状菌落 新生隐球菌 假丝酵母菌（白色念珠菌） （三）鉴定 1.糖(醇)类发酵试验 37℃孵育，观察糖发酵情况。 2.同化碳源试验 含菌生理盐水与已融化的固体同化碳源培养基(45℃)混合，然后在培养基上分别加糖，置25℃孵育观察结果。若24h后无变化可重复加糖。如能同化周围有生长圈，否则无生长。 3.同化氮源试验 同化碳源试验相同，但需用无氮源的培养基，不要加糖类，而加入硝酸钾。 检测程序 （三）病原体抗原与抗体的检测 病原体抗原成分的检测： 早期诊断 现症感染 特异性 IgM： 早期诊断 现症感染 特异性 IgG： 双份血清的滴度呈4倍或4倍以上升高， 考虑病原体现症感染 *排除交叉反应的影响 夹心ELISA( 检测抗原） 间接ELISA ( 检测抗体） （四）病原体核酸检测 1．核酸杂交技术 通过已知序列的探针与病原体的核苷酸杂交，用以了解病原体的有无。 ????Southern印迹杂交（Southern blot） Northern印迹杂交（Northern blot） 斑点杂交（dot blot） 原位杂交（in situ hybridization,ISH）? 2．PCR扩增病原体微生物特异的DNA或 RNA片段 ??????? 常用于检测不能在体外培养或目前的培养技术不敏感、 费用高昂或耗时长的病原体 核酸分子杂交(nucleic acid molecula hybridization) genome probe 32P 35S 3H 125I 生物素 地高辛 酶 genome genome genome probe probe probe 检测方法：放射自显影 底物显色 化学发光 2．PCR 3. 生物芯片技术? 核酸检测结果评价 检测病原体微生物最灵敏的方法 早期诊断 现症感染 假阳性与假阴性 （五）细菌毒素的检测 1. 内毒素的测定 常用方法：鲎试验（limulus tests）  内毒素与鲎试剂接触时，可激活凝固酶原，使可溶 性的凝固蛋白原变成凝胶状态的凝固蛋白 内毒素 (鲎试剂 ) 凝固酶原 凝固酶 凝固蛋白原 凝固蛋白(凝胶) 2. 外毒素的测定 （1）体内毒力试验 细菌外毒素对机体的毒性作用，可被相应抗毒素中和，若先给动物注射抗毒素，然后再注射外毒素，则动物不产生中毒症状。 （2）体外毒力试验 以细菌外毒素的特异性免疫血清为抗体与被检细菌外毒素(抗原)进行抗原抗体反应，来检测外毒素，从而鉴定细菌是否产生该种毒素。 白喉棒状杆菌的Elek平板毒力测定 （３) 免疫学方法：如ELISA法 葡萄球菌肠毒素、肠产毒型大肠埃希菌LT及ST等的测定 （4）分子技术 Elek平板试验 Elek Test 沉淀线(阳性) 含白喉抗毒素滤纸片