14基因诊断与基因治疗概述.ppt

第二节 基因治疗的基本概念和 基本策略 一 基因治疗（gene therapy）的概念 1、背景与历史 疾病的分子生物学了解 ???新技术新方法（特别是重组DNA）的迅速发展 ???? 1995年NIH组织 Orkin 、Motoksy对 头5年基因治疗评估 3点 建议： 发展载体技术 疾病的分子机制 动物模型 成立3个国家实验室 2000年2月 532个计划，3400余个病人 ? 2、定义 基因角度： 正常或有功能的基因置 换或增补缺陷基因。 治疗角度： 新的遗传物转移到某个 体获治疗效果。  单纯疱疹病毒胸腺嘧啶激酶基因 导入 肿瘤细胞 合成 HSV-TK 无毒性的抗病毒 有毒性的抗病毒 药物（GCV） 药物（GCV 三磷酸） 细胞死亡  第三节 基因治疗的条件 1、???目的基因的种类： 细胞因子、缺陷基因、抑癌基因、 受体基因 1、 外源基因的要求 1）? 含信号肽的cDNA，序列 正确 2）? 必要的调控元件（顺式 作用元件 启动子、增强 子、静止子）  4、基因治疗的靶细胞（target cell） 1）? 生殖细胞 全世界受严格控制 2） 体细胞 选择的标准： A、 容易取出和移植 B、?? 容易体外培养 C、??? 目的基因高效导入 D、????细胞寿命长 基因导入的方式： ex vivo——体外将基因导入target cell ,然后将此修饰过 的细胞回输给病人。 In vivo——外源基因直接导入体 内有关的组织器官。 3、 基因导入（转移）的工具与方法。 将外源基因或DNA片断导入宿主细胞进行扩增或表达，需要有一个能在该宿主细胞进行复制和表达的载体（vector）来携带。前者与后者在体外构成重组DNA分子，然后导入宿主细胞。 （一）磷酸钙转染技术 磷酸钙--DNA 导入细胞 吞噬体 转运 细胞器 瞬时 稳定 外源基因存在 外源基因非特异 于染色体DNA外 与宿主染色体DNA重组 12小时内表达 持续约3-4天 降解 稳定转化细胞株 （三）脂质体转染法 （20%） 聚阳离子脂质体-DNA 脂质体DNA阳离子复合物 负电荷的细胞膜吸收此复合物 （融合吸收） 优点：简便、低毒性、无免疫原性、 无病毒产生、化学成分已知可 大量商业供应 缺点：转染效率低，短暂表达 （五）基因枪技术 电子发射装置或高压气流 金或钨颗粒包裹外源目的DNA形成“子弹” ?  打入靶细胞 在以基因治疗为目的的载体系统中，以病毒载体最为常用，其优点： 1）? 易于改造与操作 2）? 转移效率高 3）较高的靶