2012生化实验设计蚕豆病概述.ppt

?年级、专业、班级：2012影像二大班 ?实验课时间：星期二下午 ?实验室：第三实验室 ?组别：第三组 ?组员： 屈云香、王依影、王娜、杜红香 ?报告人： 患儿，男性，3岁，因面色苍白伴血尿1天入院。1天前食用新鲜蚕豆后，今日出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白。据家长反映，患者的姐姐也曾发生过类似情况。 体格检查：体温38℃，脉搏150次/分，呼吸40次/分，血压80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色苍白，皮肤及巩膜黄染，体型较同龄人瘦小。心、肺未及异常，肝、脾未触及，双肾区无叩击痛，神经系统检查未及异常。 实验室检查：红细胞 1.98×1012/L，血红蛋白53g/L，血清总胆红素85.5μmol/L，结合胆红素13.7μmol/L，未结合胆红素71.8μmol/L，尿蛋白（++），潜血(+)，尿胆红素(-)，尿胆素原(+)，尿液镜下未见红细胞。 1、根据上述患儿的临床表现和实验室检查，初步判断患儿是何种疾病？（必答） 2、请设计实验进一步明确诊断。（必答） 要求：实验名称，实验方法，主要试剂和仪器，实验操作流程及注意事项，结果如何分析。 3、从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果。（必答） 4、要想探讨该病发生的分子基础，可以用哪些技术检测什么目的基因？（选答） 5、患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？（选答） 该患儿为： 葡萄糖 -6- 磷酸脱氢酶缺乏症 （蚕豆病） 基本情况：男、3岁、伴血尿、食用新鲜蚕豆后，出现恶心、呕吐、排尿呈酱油样色，面色苍白、低热、血压低、呼吸急促、皮肤及巩膜黄染、患者的姐姐也曾发生过类似情况。 初步诊断依据 1.患者有进食新鲜蚕豆史 2.有家族史 3.临床上出现贫血、黄疸、血红蛋白尿、等表现 概述： 汉·张仲景在《金匮要略·黄疸病脉并论》中云：“谷气不消，胃气苦浊，清气下流，小便不通，阴被其寒，热流膀胱，身体尽黄，名曰黄疸。” 发病机制： 磷酸戊糖途径 产生 ↓ G-6-PD↓ → NADPH+H+ →GSH↓ → 红细胞的抗氧化能力↓ →发生溶血 遗传方式：X连锁不完全显性遗传 潜伏期长短不一，多在进食新鲜蚕豆后1~2天内发生溶血，因吸入花粉而发病者出现症状较早最短者仅2小时，早期症状为全身不适，畏寒、低热、头晕、乏力、食欲减低、恶心、呕吐、腹痛，腹泻等。发热一般持续2~3天，严重者可迅速出现重度贫血、巩膜轻度黄染，尿色如浓茶水或酱油水。 严重者可出现全身衰竭、面色极度苍白、血压下降、神智迟钝、甚至昏迷、抽搐，少尿或无尿等急性循环衰竭和急性肾功能衰竭的表现。如抢救不及时可引起死亡，但如能及时抢救，使患者度过急性溶血危险，几天之后病情会很快好转。 若要进一步诊断，需进行以下实验 1.高铁血红蛋白还原实验 2.红细胞G-6-PD活性实验 高铁血红蛋白还原实验 G6PD缺乏 红细胞G6PD活性实验 确诊蚕豆病 高铁血红蛋白还原实验 原理：在全血中加入亚硝酸钠，使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白（MHb）,高铁血红蛋白在高铁血红蛋白还原酶的作用下又被还原为亚铁血红蛋白。在这过程中，高铁血红蛋白还原酶不仅需要亚甲蓝作为递氢体，还需要由G6PD参与磷酸戊糖途径形成NADPH作为辅酶才完成上述反应。所以，G6PD缺陷症的患者其MHb还原率下降（分光光度技术） 主要试剂：0.18mol/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液①、 0.4mmol/L亚甲蓝溶液 ②、0. 28 mol/ L 葡萄糖溶液③、混合液 （等量①+②+③）、生理盐水、抗凝剂 仪器：紫外分光光度计水浴箱、离心机、试管3支 实验步骤 1、取静脉血1. 8mL 于抗凝管，混匀。 抗凝管(含0. 2 mL109 mmol/ L抗凝剂+葡萄糖20 mg) 2、1000 r/ min离心沉淀 15 min。调整血细胞与血浆比侧为1：1后再混匀。 3、将0.18 mol／L 亚硝酸钠一0.28 mol／L葡萄糖溶液与0.4 mmol／L亚甲基蓝溶液等量混合．形成混合试剂。 4、取1 5 moL×150 mm 试管3支，标明A、B、C，按下表顺序进行操作。 1、血细胞比容比值过低，高铁血红蛋白还原率降低。 应将血细胞比容调整到0.35-0.40 2