2013实验三、细菌芽孢及荚膜染色观察概述.ppt

实 验 三 细菌芽孢及荚膜染色观察 一、实验目的： 1、学习并掌握芽孢及荚膜的染色方法； 2、初步了解芽孢杆菌及细菌荚膜的形态特征。 二、实验原理： 芽孢是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成 芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊 内的位置，芽孢囊是否膨大等特征是 鉴定细菌的依据之一。 由于芽孢壁厚、透性低、不易着色，用染料进行单染色时，菌体和芽孢囊着色，而芽孢囊内的芽孢不着色或仅显很淡的颜色。为了使芽孢着色便于观察，可用芽孢染色法。 芽孢染色的原理是：用弱碱性染色剂孔雀绿，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱。当再用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。 三、实验材料； 菌 种：苏云金芽孢杆菌、钾细菌 染色剂：5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液； 石炭酸复红，黑色素等 荚膜是包围在某些细菌细胞外的一层粘液状物质，其成分为多糖或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱，不易着色，易在用水冲洗时被除去，所以通常用衬托染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈，由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变形影响观察。 四、实验方法： 一)、芽孢染色 1、制片：涂片-干燥-固定 2、染色：加数滴孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片一端，在微火上加热至染料冒蒸气并开始计时，维持5min（其间补充染液防蒸干）。 3、缓流水洗 4、复染：用番红染液复染2分钟。 5、缓流水洗、干燥 6、镜检：用油镜观察（芽孢呈亮绿色，菌体呈红色,或可观察到伴孢晶体） 芽孢 菌体 二）、荚膜染色 1、制片：取一滴无菌水于载玻片上，用接种环取钾细菌在水滴中，制成涂片，晾干。（不可加热！） 2、染色：用石碳酸复红染色液染色3-4分钟，用水轻轻冲洗，晾干。 3、刮片：在玻片一端加一小滴黑色素，另外取一块干净的载玻片与黑色素接触，将黑色素在涂片上轻轻刮过，形成一薄层，自然干燥。 4、镜检：菌体呈红色，荚膜无色，背景灰色。 钾细菌菌体 荚膜 五、实验结果： 1、绘图表示芽孢杆菌的形态特征。 2、绘图说明你所观察到的细菌的菌体和荚膜的形态。 思考题： 1、为什么芽孢染色要加热？为什么芽孢及营养体能染成不同的颜色？ 2、组成荚膜的成分是什么？涂片一般用什么方法固定，为什么？