2014版安徽重庆生物高考专题二轮专题九第1讲基因工程、细胞工程概述.ppt

A.正常细胞与癌细胞的增殖速率相同 B.有无血清对正常细胞培养的影响不同 C.培养基中补充血清有助于正常细胞的培养 D.培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大 【解题探究】 (1)曲线分析。 ①若研究有无血清对癌细胞培养的影响,应分析哪两条曲线? ②若研究有无血清对正常细胞培养的影响,应分析哪两条曲线? ③若研究无血清对正常细胞与癌细胞的影响,应分析哪两条曲线? 提示:①A、B两条曲线。 ②C、D两条曲线。 ③B、D两条曲线。 A.1为EcoRⅠ,2为BamHⅠ,3为EcoRⅠ,4为PstⅠ B.1为BamHⅠ,2为EcoRⅠ,3为EcoRⅠ,4为PstⅠ C.1为EcoRⅠ,2为PstⅠ,3为PstⅠ,4为BamHⅠ D.1为BamHⅠ,2为EcoRⅠ,3为PstⅠ,4为EcoRⅠ 【解析】选D。用PstⅠ和EcoRⅠ两种酶同时切割该DNA片段,应保证酶切后目的基因两端具有不同的黏性末端,才能防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状。A中1和3,B中2和3均为EcoRⅠ的酶切位点,C中2和3为PstⅠ酶切位点,均形成相同的黏性末端;D中2和3分别被EcoRⅠ和PstⅠ两种酶切割,形成不同的黏性末端。 热点考向 2 基因工程的操作步骤? 【典例2】肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达增强后,发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。 (1)进行过程①时,需要用到　　　　　　等工具酶。 (2)研究发现,let-7基因能影响癌基因RAS的表达,其影响机理如图2。据图分析,可从细胞中提取　　　　　　进行分子杂交,以直接检测1et-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制,可能是由于细胞中　　　　　　(RASmRNA/RAS蛋白)含量减少引起的。 (3)进行过程②时,需用　　　　　酶处理贴附在培养皿壁上的细胞,以利于细胞培养。③过程常用的方法是　　　　　　。 【解题探究】 (1)反转录法合成目的基因的条件。 ①需要的酶:　　　　　　;②模板:　　　　　　　;③原料:　　　　　　　。 提示:①反转录酶　②mRNA　③脱氧核苷酸 (2)目的基因的检测与鉴定。 ①检测目的基因是否导入受体细胞的方法:　　　　　　。 ②检测目的基因是否转录所使用的基因探针是什么? 提示:①DNA分子杂交技术 ②基因探针为放射性同位素或荧光标记的目的基因单链。 【解析】(1)构建重组载体时,应用限制性核酸内切酶切开载体并插入目的基因,再用DNA连接酶连接为重组载体。 (2)检测目的基因是否转录,可以从细胞中提取miRNA,与基因探针进行分子杂交。let-7基因表达增强,会使RAS蛋白翻译受阻,RAS蛋白含量减少,使肺癌细胞增殖受到抑制。 (3)进行细胞培养时,需要用胰蛋白酶处理贴附在培养皿壁上的细胞。将目的基因导入动物细胞常用显微注射法。 答案:(1)限制性核酸内切酶、DNA连接酶 (2)miRNA　RAS蛋白 (3)胰蛋白　显微注射法 【总结提升】目的基因的检测与鉴定方法 结果显示 方法 检测内容 是否出现杂交带 抗原-抗体杂交 目的基因是否翻译成蛋白质 第 三 步 受体mRNA是否和基因探针结合 分子杂交技 术(DNA和 mRNA之 间杂交) 目的基因是否转录出mRNA 第 二 步 受体DNA是否和基因探针结合 DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间) 目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上 第 一 步 分子 水平 检测 步骤 类型 结果显示 方法 检测内容 直接检测转基因生物是否具有目的基因控制的性状 个体 生物 学水 平鉴 定 步骤 类型 【变式训练】(2013·南通模拟)科研人员以抗四环素基因为标记基因,通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白,治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计中,不合理的是(　　) A.利用小鼠DNA分子通过PCR技术克隆出β-珠蛋白基因的编码序列 B.用编码序列加启动子、抗四环素基因等元件来构建表达载体 C.用Ca2+处理大肠杆菌后,将表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中 D.用含有四环素的培养基筛选出已经导入β-珠蛋白编码序列的大肠杆菌 【解析】选C。本题考查基因工程的基本操作程序中的相关知识。通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的β-珠蛋白的实验中,可通过PCR技术从小鼠的DNA分子中获取目的基因,构建表达载体后,导入大肠杆菌。因为实验以抗四环素基因为标记基因,如果受体大肠杆菌本身就具有四环素抗性,将无法检测大肠杆菌是否获取目的基因。 热点考向 3 基因工程的应用? 【典例3】基因敲除是根据DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段,从而达