2015.3.2微生物的实验室培养概述.ppt

参见中学教材学习讲义 p23 选择培养基 二. 无菌技术 思考： 1. 什么是无菌技术？包括哪些方面？ 2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考） 3. 消毒和灭菌的概念？二者的主要区别？ 4. 常用的消毒和灭菌方法有哪些？ 三. 实验操作---大肠杆菌的纯化培养 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板 （二）纯化大肠杆菌 最常用的接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法 中学教材学习讲义p26 纯化后，将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱中，培养12h和24h后，分别观察并记录结果 课题延伸 * 专题2 :微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养 微生物的实验室培养条件： （1）合适的营养和环境条件 （2）确保其他微生物无法混入 一. 培养基 2. 种类： 按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 1. 概念： 2. 种类： 按物理形态分 液体培养基、半固体培养基 固体培养基 应用微生物分离、鉴定、计数和 菌种保存等方面 按照培养基用途分 选择性培养基 鉴别培养基 按照培养基的成分来分 合成培养基、天然培养基 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入四环素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞 不加氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基: 分离杂交瘤细胞 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 3. 成分： 思考： 各种培养基的具体配方不同，但一般都包括哪些成分？ 水、无机盐、碳源、氮源、 +满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求 C C 无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防 止杂菌污染的方法。 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 课本p15 中学教材学习讲义p24 4.常用的消毒方法： 煮沸消毒法，巴氏消毒法，化学药剂消毒法 紫外线 常用的灭菌方法： 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 ：100kPa 121℃ 15-30min 牛奶 接种室、接种箱或超净工作台 接种工具，接种环、接种针或其他金属用具 玻璃器皿（吸管、培养皿） 酒精擦拭双手、氯气消毒水源 培养基及容器的灭菌 判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。 （1）豆浆 （2）游泳池 （3）超净工作台 （4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶 （5）培养细菌用的培养皿 （6）无菌水 （7）牛肉膏蛋白胨培养基 （8）接种环、接种针（9）实验操作者的双手 （冷却至50℃） 两种纯化方法的比较？ 结果分析与评价 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。 菌种的保存 1、临时保藏法： 对象： 温度： 缺点： 2、甘油管藏法： 对象： 温度： （P20） 频繁使用的菌种 4℃（冰箱） 容易被污染或 产生变异 长期保存的菌种 -20℃（冷冻箱） 例1．关微生物营养物质的叙述中，正确的是 A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 例2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前 答案：D 答案：B 接种环 接种针 倒平板 讨论1，2 讨论3，4 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基 3.平板冷凝后，为什么要将