2015动物细胞杂交概述.ppt

1、定义：(细胞杂交)指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。 2、诱导融合的因素 生物法：灭活的病毒诱导融合. 原理(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。) 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合. 物理法：电激融合 3、动物细胞融合技术的应用 1.细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—蛙、等 2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。 3.重要用途：制备单克隆抗体 人们获得抗体的传统方法是? 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体 这种方法的缺点是什么? 效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？ B淋巴细胞在体外不能无限增殖。 技术原理： 4）动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 （获取大量单克隆抗体） 4.单克隆抗体的制备——体外培养法，动物体内诱生法？ 小鼠腹腔内有自然吞噬作用，避免污染；小鼠腹腔本身为杂交瘤的良好培养环境，使杂交瘤细胞始终处于对数生长状态。 体外培养法——大规模生产 体内诱生法——小规模生产 * * * * 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 植物体细胞杂交 去壁 融合 组培 知识回顾： 动物细胞？ 一、动物细胞融合 ◆杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞。 细胞融合是正常的生命活动 两个体细胞的融合 受精作用 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞融合、形成杂种细胞 P52生物技术资料卡：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合 用 途 诱 导 方 法 融合前处理 原 理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 细胞的增殖 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学方法 物理、化学、 生物方法 获得部分 或完整植株 主要用于制备 单克隆抗体 1、抗体是由何种细胞产生的？ 浆细胞（效应B细胞） 2、抗体是如何产生的？ 3、一种B淋巴细胞能产生几种抗体？ 一种 B淋巴细胞增殖分化成浆细胞 抗原 二：动物细胞融合的成功应用 ——单克隆抗体的制备 思考 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂种细胞 动物细胞培养技术 动物细胞融合 创始人：米尔斯坦 单克隆抗体 既能产生特异性抗体，又能大量繁殖 柯勒 单克隆抗体的制备—极富创造性的方案 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。 杂交细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 1）单个B淋巴细胞产生单一抗体 （但不能无限增殖） 2）肿瘤细胞能无限增殖 （但不能分泌单一抗体） 3）细胞融合技术杂交瘤细胞 （既无限增殖又分泌单一抗体） 第1次筛选得到杂交瘤细胞 第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。 *