芽孢杆菌产聚糖酶酶活稳定性的提高论文.doc

目录摘要 1ABSTRACT 2第一章绪论 31.1β-甘露聚糖酶的研究现状 31.1.1β-甘露聚糖酶的来源 31.1.2β-甘露聚糖酶的性质 41.1.3β-甘露聚糖酶的诱导 41.2β-甘露聚糖酶的纯化 51.2.1纯化的意义 51.2.2分离纯化工艺 61.3β-甘露聚糖酶的稳定性及稳定化 71.4β-甘露聚糖酶的应用 81.4.1石油钻采 81.4.2饲料添加剂 81.4.3食品保健 81.4.4造纸工业 91.4.5纺织工业 91.4.6工具酶 91.5研究目的和研究内容 91.5.1研究目的 91.5.2研究内容 10第二章枯草芽孢杆菌β-甘露聚糖酶的产生及性质 102.1实验仪器与材料 102.1.1实验仪器与设备 102.1.2试剂 112.1.3菌种 112.1.4培养基 122.2实验方法 122.2.1粗酶液的制备 122.2.2酶活的测定 122.2.3温度对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 142.2.4不同浓缩倍数对β-甘露聚糖酶酶活稳定性影响 142.2.5反复冻融对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 142.2.6激活剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 142.2.7防腐剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 152.2.8金属离子螯合剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 152.3实验结果与分析 152.3.1温度对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 152.3.2不同浓缩倍数对β-甘露聚糖酶酶活稳定性影响 162.3.3反复冻融对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 172.3反复冻融情况下酶的稳定性 172.3.4保护剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 172.3.5防腐剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 182.3.6金属离子螯合剂对β-甘露聚糖酶酶活稳定性的影响 18结论 18展望 19参考文献 20致谢 22摘要β一甘露聚糖酶是一种重要的半纤维素酶，应用广泛，多采用微生物发酵制备。本文首先利用芽孢杆菌对发酵培养基进行培养，并通过分离纯化制得高纯酶进行运用。对酶的稳定性进行研究，通过添加稳定化试剂，储存于不同的温度，将酶浓缩成不同的倍数，以及反复冻融来研究酶的稳定性。主要工作如下:对芽孢杆菌发酵产生的酶液进行稳定性检测试验，确定了芽孢杆菌产甘露聚糖酶的在各种不同的条件下酶活的稳定性情况;优化了酶液在储存过程中的可能遇到的各种情况，大大降低了运输和储存成本，有利于产品的后续精制以及使用。β一甘露聚糖酶粗酶液经盐析、超滤、离子交换层析、凝胶层析及超速离心即可制得纯酶液。利用酶活随温度和反复冻融、不同浓缩倍数以及各种添加剂的变化而变化的规律，初步探讨了各种外界因素对酶活力的影响。考察了七种添加剂(葡萄糖、海藻酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠、明胶、EDTA、乙醇)在不同浓度下对制备的β一甘露聚糖酶稳定性的影响，结果表明:添加葡萄糖可大幅提高酶的热稳定性，4℃时甘露聚糖酶的稳定性较高。确定了浓缩酶的稳定性，以及反复冻融对芽孢杆菌产甘露聚糖酶的稳定性的影响。关键词：芽孢杆菌甘露聚糖酶浓缩温度反复冻融添加剂稳定性ABSTRACTβ-mannanaseisanimportanthemicellulase,widelyused,theuseofmicrobialfermentationpreparation.ThefirstuseofBacillusculturefermentationmedium,andseparationandpurificationsystem,highpurityenzymeuse.Tostudythestabilityoftheenzymebyaddingstablereagent,storedatdifferenttemperatures,theenzymeisconcentratedintoadifferentmultiples,aswellasrepeatedfreezingandthawingtostudythestabilityoftheenzyme.Themainworkisasfollows:EnzymeproducedbyBacillusstabilitytestingtodeterminethestabilityofthesituationBacillusmannanaseactivityinavarietyofconditions;tooptimizetheenzymeduringstoragemayencountervarioussituations,whichgreatlyreducesthecostoftransportationandstorage,follow-upofrefinedproductsandtheuseof.β-mannanasecrudeenzymeso