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中国南海海洋真菌1893#代谢产物研究 　　中国南海海洋真菌1893＃代谢产物研究 高剑 陈光英 林永成* 中山大学化学与化学工程学院天然产物研究室，广州，510275 摘要 海洋真菌是潜在的具有多种生物活性代谢产物的来源，代表了寻找新的海洋药物的方向。国内外在这方面的研究已经取得了丰硕的成果，随着研究方法和手段的不断发展，海洋真菌的活性代谢产物研究将迎来新的前景。 海洋真菌1893＃是从南中国海的红树林叶中分离得到的，其培养液乙酸乙酯提取物对棉铃虫和水蛛具有强的抑制活性。我们从1893#菌体的甲醇提取物中分离得到四个化合物，即麦角甾醇、环（酪-亮）二肽、饱和四羟基神经鞘胺醇和甘露醇。它们的结构通过1HNMR、13CNMR、FABMS和IR确定。 关键词 海洋真菌 代谢产物 环二肽 1. 前 言 　　海洋是生命的摇篮，占球表面积的70％左右，包含地球上80％以上的生物资源。海洋生物资源中活性代谢产物的研究一直是海洋天然产物化学研究的主要内容。其中抗肿瘤海洋天然产物的研究最为活跃。药理活性试验证明1893＃培养液对棉铃虫和水蛛具有强的抑制活性，其抑制效果可以达到ng级，因此分离出具有这些具有活性的化合物就有好的实用价值和应用前景。 2. 实验部分 2.1 试剂和仪器 2.1.1 试剂 薄层层析硅胶G 、柱层析硅胶H 青岛海洋化工厂 甲醇、乙酸乙酯、石油醚、丙酮、氯仿等试剂均为市售分析纯 2.1.2 仪器 熔点测定仪 旋转蒸发仪 傅立叶变换红外光谱仪 Nicolet 5DX-FTIR 500M 核磁共振仪 Varian Inova-500M 紫外光谱仪 Shimadzu UV-240 2.2 菌体来源 1893＃菌株是采自中国南海红树林Kandelia candel的内生真菌，由香港城市大学Vrijmoed和Jones教授提供，菌种分别保存在香港城市大学和中山大学化学院应用化学系。 2.3 菌体培养条件 菌种以PDA为培养基,4℃保存。发酵培养基为葡萄糖0.5%, 蛋白胨0.1%, 酵母膏0.05%, 粗海盐0.2%, PH 7.0。500mL三角瓶，内装培养液300mL，8Pa 15min灭菌后接种。共接种200L，25℃静置培养40d，过滤，收集菌体，风干，分别用500ml甲醇浸提5次，真空减压浓缩甲醇提取液，得浸膏50g。 2.4 代谢产物的分离和结构分析 将浸膏用少量甲醇溶解后拌硅胶装大柱，用从小到大的极性溶剂洗脱，得到不同极性下的混合物，溶剂的极性大小由石油醚和乙酸乙酯的成分多少调节，点板观察跑点的情况，分别再装小柱，再用一定极性的溶剂洗脱，这样不断的减少混合物的个数，最后再重结晶得到较纯的化合物。得到的较纯的物质先经过熔点测定，然后用IR、1HNMR、13CNMR和FABMS测定化合物的结构。先后分离得到四种化合物：麦角甾醇（37）、环（酪-亮）二肽（38）、饱和四羟基神经鞘胺醇（39）、甘露醇（40），这四个化合物的谱图分析、结构分别如下： 　　麦角甾醇（37）为白色晶体，它与麦角甾醇标准品进行TLC展开，二者的Rf值一致，混合熔点不变，确定为麦角甾醇。C28H44O, 分子量396.66。 白色针晶, mp 155-157℃. 1H NMR(CDCl3):δ0.63(s,3H), 0.83(d,6.0Hz,3H), 0.84(d,6.0Hz, 3H), 0.92(s,3H), 1.03(d, 6.5Hz, 3H), 3.64( m, 1H), 5.19(dd, 15.5, 8Hz, 1H), 5.22(dd, 15, 7Hz, 1H), 5.38(d, 6.0Hz, 1H), 5.57(d, 4.0Hz, 1H). 　　　　　麦角甾醇（37） 　　　　　　 环（酪-亮）二肽（38） 环（酪-亮）二肽（38） 从氢谱6.70(dd,2,8.5Hz)和7.00(dd,2,8.5Hz)可知分子中含有一个对位二取代苯环。两个甲基0.74(d,6Hz)提示存在异丙基结构。从IR(KBr)νmax1670cm-1和δC167.3,166.2ppm可知分子中存在2个酰胺键。苯环中其中一个季碳位移值高达156.3ppm, 应是连酚羟基的碳。在甲醇作溶剂的氢谱中，酚羟基及酰胺氢等活泼氢均未出峰。根据化