210.38.136.668022uploadppt实验八%20腺垂体激素对蛙体色和生殖的影.ppt

* * 一、目的 （1）掌握促黄体素释放素类似物（LRH-A）和人绒毛膜促性腺激素（HCG）引起蛙排精的机理； （2）掌握垂体中与体色有关的褪黑激素的生理作用； （3）学习口腔内摘除脑垂体的方法。 二、原理 （1）LRH-A和HCG经体内注射后都可引起蛙（或蟾蜍）排精，两者的作用机理不同。HCG可直接作用于精巢引起排精，LRH-A须通过垂体释放GTH，从而间接引起排精； （2）腺垂体分泌促黑激素，故去除垂体将导致蛙体色变淡。 实验八 腺垂体激素对蛙体色和生殖的影响 三、材料和器材： 每组用成熟雄蛙4只、LRH-A、HCG；2ml注射器、细玻璃滴管、小烧杯、0.65％生理盐水或任氏液；常规手术器械一套；蛙板、纱布、大头针、图订、纱布、布条、光学显微镜、载玻片。 四、方法和步骤 1、每组选择4只颜色相似的成体雄蛙； 2、预检精子的有无； 用滴管插入泄殖腔，管口先向下，再稍向上，即可插入，深度0.5～1cm，然后轻轻前后移动吸取尿液，滴一滴于载波片上，用低倍显微镜检查是否有精子存在，尿液中无精子的雄蛙方可用于本实验，并编号。 注：如泄殖腔中无尿液，可先用滴管注入少量生理盐水或任氏液后再吸。 3、催产药物注射； 取两只经预检无精子的蛙，其中一只从背部皮下注入HCG 200～300国际单位，另一只注射LRH-A 10～20μg。注射后的蛙，置于室温下1.5～2小时后，用与预检相同的方法吸出尿液在低倍显微镜下检查是否发现精子。 注：蛙精子头部棒状，头尖，有一鞭毛状细尾。初吸出的精子具前进运动或左右摆动，稍过些时间不活动。 4、取经预检正常的蛙两只，摘除垂体； 左手打开蛙口腔，右手用剪刀（或解剖刀）沿中线剪（切）开上颚粘膜，剪开（切口）部位在眼球稍下方的左、右耳咽管孔连线的中央处。 将粘膜向两侧拉开，暴露头骨，可见副蝶骨形如短剑状，剑尖指向蛙前方，剑柄在后方。小心地用剪刀尖和镊子将副蝶骨除去，直径约3mm，垂体就埋藏在副蝶骨的剑尖与剑柄交界处，通过缺口，可看到位于视交叉下一粉红色扁圆形体即为垂体，其一部分被漏斗所遮盖，用针挑开硬膜，用小镊子将垂体夹出，由于脑内压较高，有时垂体被自动挤出。伤口不必缝合，若有出血，则应止血。