核酸药物及制药技术资料.ppt

第一节 核酸药物及其制药技术 反义核酸（Antisense nucleic acid)和核酶 (Ribozyme) RNA干扰 (RNAi)药物 核酸药物的修饰和给药 反义核酸 作用机理 特点 双链RNA（如siRNA ）作用强烈； 与核酶连接作用更强。 核酶（Ribozyme) 核酶不是普通的蛋白质酶，而是一类具催化活性的核酸分子,1980年Cech在嗜热四膜虫中首先发现。 天然锤头状核酶示意图 反义核苷酸药物的应用 反义核酸技术在实验室中取得了较好的效果，90年代以来国外一些制药公司开展了若干反义药物的临床实验。 1997年，美国Genta公司研制了针对Bcl2基因的反义药物，用于治疗前列腺癌和其他恶性肿瘤。 美国Hybridon公司研制了针对巨细胞病毒（CMV）感染的反义药物并进行了临床实验。 RNA干扰药物 RNA干扰（RNA interference，RNAi） 是一种由双链RNA诱导的基因表达调控和基因沉默的过程 ，其广泛存在于从植物、无脊椎动物到哺乳动物的各种生物。 RNAi的作用原理 双链RNA诱导诱导RNAi的过程主要分为两个阶段： Ⅰ启动阶段 Ⅱ执行阶段 RNAi的作用原理 启动阶段 当细胞中由于感染等原因出现双链RNA分子时，细胞中一种称为Dicer的核酸酶就会识别这些双链RNA，并将其降解成21-23bp长的小干扰RNA（siRNA），单链siRNA与一些蛋白形成复合体，构成“RNA诱导的沉默小体” （RNA-induced silencing complex，RISC） 执行阶段 当目标mRNA与RISC中的siRNA完全配对时， RISC就会切割目标RNA，并由细胞中的核酸酶将其进一步降解，从而抑制目标基因的表达 启动阶段原理图 启动阶段 执行阶段原理图 执行阶段 siRNA药物 长链的RNA会诱导细胞合成并分泌干扰素，干扰素又会抑制细胞的蛋白质合成，造成一定的副作用。如果直接用21-23bp的小双链RNA即siRNA，则不会诱导干扰素反应，却能在细胞中激活RISC，发挥抑制基因表达的作用。 siRNA的作用 体外实验和动物模型研究证明siRNA药物可以成功抑制HIV、乙肝病毒、流感病毒、SARS冠状病毒、口蹄疫病毒等的感染。 siRNA还可以治疗一些非感染性疾病：美国正在开发一种治疗老年性黄斑变性的siRNA药物 siRNA药物优点与缺点 优点：与反义RNA相似，siRNA作为药物具有目标基因专一 性强 与反义RNA相比，siRNA药物的作用机制更加明确， 效果更加肯定 缺点：siRNA的作用需要与目标RNA间发生完全的配对，因 此对于目标RNA的突变很敏感。个别位点的突变会使 效果大打折扣 在用于抗病毒治疗时，病毒可能出现抗药突变株 siRNA的设计和制备 siRNA的制备 siRNA的设计和制备 siRNA的设计 应选取对于疾病发生具有至关重要作用，而对细胞的其他功能影响不大的保守基因作为目标基因，再根据目标基因的序列设计siRNA Tom Tuschl根据实验提出了一个设计siRNA的原则： 选择转译起始密码子后50-100碱基的范围，以AA作为正义链的第1，2个核苷酸，GC比为50﹪左右，同时在正义链和反义链的3′-都有TT两个核苷酸的突变 siRNA的设计和制备 siRNA的制备 核酸药物的修饰和给药 人体内存在大量的核酸酶，在体内应用反义RNA，siRNA等新型核酸药物治疗时，一个关键问题就是保证它们能够抵抗核酸酶的降解并被有效地运输到靶细胞。RNA的化学修饰是一个有效的途径 核酸药物的修饰和给药 增强核酸药物有效运送到靶组织的方式： Ⅰ 用脂质体等材料包埋核酸药物静脉注射。如果在脂质体上加入有助于膜融合的分子如氯喹，可以进一步提高它们进入细胞的效率 Ⅱ 在核酸分子上连接一段可以进入细胞的肽段即转导肽 不同的应用目的应采用不同的给药方式：局部注射、静脉注射，有报道表明核酸药物还可以通过皮肤给药 为天然单链RNA，具有过度分子内配对能力，形成复杂的二级和三级结构。 反义RNA分子 ： 可以和目标基因的mRNA互补的 一段