植物组织培养中的生理学实验资料.ppt

植物组织培养技术 植物组织培养的特点： 　无菌条件 　完全的异养 　具有普通植株生长的特点 植物生理学是研究植物生命活动规律的科学，所以在组织培养的各个阶段与植物生理学息息相关。 分为培养环境，培养基成分，激素不同配比 二、材料前处理： 1、在晴天三天后，最好是在晴天一星期后，处理外植体。 2、在处理前一天或者前几天对母株进行多菌灵800ppm进行喷施。 3、外植体部分木质化程度低，最好是刚出生的新芽或新叶。 4、外植体进行组培瓶消毒处理前，将枝条前1cm长度。 三、消毒处理 1、常用组合是70%的酒精+0.1%的升汞。 2、70%的酒精处理不超过1min。 3、在处理最后的一次用无菌Cacl2溶液。 四、无菌操作要点 五、愈伤组织培养的主要过程 　　　先将外植体（叶或芽）在暗培养一个月后，使其产生愈伤组织，后将愈伤组织置入摇床中，暗培养三周，每隔一周更换一次培养液容易产生胚性细胞。 注意问题： 　　　愈伤组织的面积需要一定的面积 　　　液体培养的周期不宜过长，需及时更换培养液 　　　培养液中的细胞分裂素的含量不要过高 六、培养基成分与植物生长关系 在组织培养中，调整培养基配方主是针对大量元素进行扩增或减少，一般不对微量元素或有机物进行调整。 当培养基配方不适时，培养物将生长不良，所出现的症状与缺素症相类似，主要有下列情况： 　　　 　　　　 在组织培养中，氮元素可以有两种形态，即硝态氮和铵态氮。硝态氮通常以硝酸铵或硝酸钾的形式添加。在一般情况下，NH4+浓度过高时对培养物有毒害作用。 个人的经验：在邓恩桉组织培养中，生根培养比较困难，曾改良过其培养基，大大降低或不用硝酸铵，提高硝酸钾的含量，可达到原来的两倍的含量。在保证健康生长的情况，促使其正常生根。 四、植物激素与植物生长的关系 不同的植物激素的配比可产生不同分化类型 培养初期对激素的需求量较高，随着继代次数的增加，激素需求量会逐步下降，甚至有些植物组织表现出完全不需要任何植物激素。如菠萝的组织培养即是。这与那些原初就能不依靠植物激素的种类不同。通常将这一现象称为“驯化”，那些组织就称为“驯化了的组织”。 　　　桉树组织培养时，在芽的诱导培养过程，不用或用很低含量的细胞分裂素，这个阶段外植体主要是利用自身所储存的营养物质进行萌芽生长。 　　　在增殖第一代培养时，同时加大细胞生长素与细胞分裂素的量，细胞分裂素与细胞生长的含量比例一般为10：1，细胞分裂素最高时可以达10mg/L。在增殖第三代培养以后，开始降低激素的含量，但一般不能少于2mg/L。在第十代培养时（即十个月后）可以不用激素，培养物仍保持较高的繁殖系数。 在生根培养中，主要措施是降低培养基的大量元素的量，一般为增殖培养基的含量的1/2，甚至是1/3。 用IBA替换其他细胞素，降低可不用NAA，如果能加入生根粉ABT系列的生根促进剂，效果会更为理想。 七 正交试验设计 §7.1 基本概念 §7.2 基本方法（极差分析法） §7.3 正交试验原理解析 三 正交表及其特点 1 定义：是一种规格化的表格。它是正交试验法的基本工具 2 代号 例 ３交互作用及交互作用列表 ４分类 （1）从各列水平数是否相同划分 ①水平数相同的正交表 ②水平数不等的正交表（混合水平正交表） （2）交互作用是否单独占列划分 ①完备正交表 ②不完备正交表L12（211），L18（21×37），L36（211×313） ５ 正交表的性质 3 交互作用及交互作用列表 交互作用：在多因素试验中一个因素对试验结果的影响依赖于另一因素所取的水平 时，称两因素有交互作用。 在多因素对比试验中，某些因素对指标的影响往往是互相制约、互相联系的。 即在试验中不仅因素起作用，而且因素间有时联合起来起作用，这种联合作用并 不等于各因素单独作用所产生的影响之和，称这种联合作用为交互作用。 例：某农场对四块大豆试验田作施肥试验。每块田以不同的方式施以磷肥和氮肥，其产量如下： 可以看出 当施氮肥和不施氮肥时，施以4公斤磷肥后的增产数量是不同的 当施磷肥和不施磷肥时，施以6公斤氮肥后的增产数量是不同的 若N, P分别起作用时增产为50, 30kg。但同时施时其效果并不是50+30=80kg，