水中微生物的测定资料.ppt

实验水中细菌总数的测定 实验目的 掌握水样的采取方法。 掌握水样细菌总数测定的方法；了解水源水的平板菌落计数的原则。 学习检测水中大肠菌群的原理和方法。 了解大肠菌群数量与水质状况的关系。 了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。 实验原理 饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总数和大肠菌群数来确定。 细菌总数是指1毫升水样在一定的培养基平板（普通琼脂培养基）中，37℃24小时培养后所生长的菌落数，此值仅是一种近似值。一般规定，1毫升自来水的总菌数不得超过100个。 如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染而引起伤寒、痢疾、霍乱等肠道病的流行，但肠道病原菌在水中数量较少，又易变异与死亡，故从水中特别是自来水中分离出病原菌，常常有困难。 而大肠菌群是肠道好氧菌中最普遍和数量最多的一种，所以常将其作为粪便污染的标志，即根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。一般规定每1000毫升自来水中大肠菌群不超过三个。 实验材料 普通琼脂培养基；乳糖蛋白胨发酵管；3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管，复红亚硫酸钠培养基。 无菌空瓶；灭菌水；灭菌培养皿、吸管、试管。 自来水、池水、河水或湖水 实验步骤 水样的采取 自来水： 先将自来水龙头用火焰灼烧3min，再开放水龙头水流5min，以灭菌三角烧瓶接取水样。 池水、河水或湖水： 取距水面10-15cm的深层水样，将具塞玻璃瓶瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，盛满后将瓶塞盖好再从水中取出。 细菌总数测定1）自来水 吸取1ml水样与平皿内冷却至45℃的培养基混匀，于37℃下培养24h计数，共两皿。同时做不接水样的空白皿对照试验。2） 池水、河水或湖水  采用平板菌落计数法：一般中等污秽水样，取10－1、10－2、10－3三个稀释度，污秽严重的取10－2、10－3、10－4三个稀释度。 最后三个稀释度的稀释水样重复上述自来水的细菌测定试验。 菌落计数方法（1）计算相同稀释度的平均菌落数有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数×2（2）选择平均菌落数在30～300之间的平板只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。（3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘稀释倍数。（4） 所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘稀释倍数。（5） 所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数。 大肠菌群检查 －－－滤膜法过滤水样用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，帖放在已灭菌的滤床上、，固定好滤器，将100mL水浴(如水样含菌数较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释)注入滤器中，打开滤器阀门，在负0.5大气压下抽滤。 培养水样滤完后，再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基(36.1.3.1)上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入37℃恒温箱内培养22～24h。 观察结果 挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。 紫红色，具有金属光泽的菌落。 深红色，不带或略带金属光泽的菌落淡红色，中心色较深的菌落。 凡革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，再接种乳糖蛋白胨培养基液，于37℃培养24h，有产酸产气者，则判定为总大肠菌群阳性。 计算滤膜上生长的总大肠菌群数 水中总大肠菌群数/个L-1＝滤膜生长的菌落数×1000÷过滤水样量（滤膜上菌落数以20～60个/片为适宜） 实验结果 将水中总细菌数量计算出来 将自来水中总大肠菌群数量计算出来 问题与讨论 检查饮用水中的大肠菌群有何意义？ * * 水样稀释过程示意图 计算菌数落总数方法举例 30500或3.1×104 -- 12 305 无法计数 6 270或2.7×104 -- 5 11 27 5 513000或5.1×105 -- 513 1650 无法计数 4 27100或2.7×104 2.2 60 271 2890 3 37750或3.8×104 1.6 46 295 2760 2 16400或1.6×104 -- 20 164 1365 1 10-3 10-2 10-1 菌落总烽（个/ml） 两个稀释度菌落数之比 不同稀释的平均菌落数 例次 两位以后的数字采取四舍五入的方法去掉 备注 五、实验报告 1．结果 （1）自来水 ? ? 2 ? ? 1 1ml自来水中细菌总