微生物的培养与应用ppt讲解.ppt

2．统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法： ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。 ②缺点：不能区分死菌与活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法)： ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约 含有多少活菌。 ②操作： a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。 b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300 的平板进行计数。 ③计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。注意：统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。 3．实验中的注意事项 (1)设立重复组：统计某一稀释度下平板上的菌落数时，要至少涂布3个平板作重复组，增强实验结果的说服力与准确性。 (2)对照原则： ①判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。 ②判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。 (3)在微生物数量测定时，应选取具有合适的菌落数的培养基，如细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有30～ 300个菌落数为宜；霉菌以每个培养皿内有10～100个菌落数为宜。 [小结]　选择培养基应用实例 ①培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。 ②培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。 ③培养基中缺乏氮源时，可以分离出固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。 ④当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，而使能够利用石油的微生物生存，得到能消除石油污染的微生物。 ⑤改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。 高考地位 近几年本考点考查频率不高，但在一些一些省市的非选择题中有所涉及 命题角度 考题多以非选择题的形式出现，微生物的生存及培养结合在一起考查，通过生产生活中有关微生物计数、微生物分离与培养等实际问题进行考查，如典例3。 [典例3]　富集培养是微生物学中最强有力的技术手段之一。主要是指利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定环境条件使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。富集条件可根据所需分离的微生物的特点，从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择，如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。 (1)本实验所需培养基为________________________， 碳源为________________________。 (2)实验原理是__________________________________ _________________________________________________。 (3)①→③重复培养的目的是____ ______________。 (4)⑤的菌落中大部分是降解________的微生物。 (5)⑥为________组，⑦为________组，设置⑥的目的是_______________________。 (6) ⑤→⑥采用________法，接种到⑥的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是_____________。 [解析]　富集培养的培养基是一种选择培养基，可用于具有某种代谢特点的微生物，本题就是为了选择出能分解对羟基苯甲酸的微生物。该实验的培养基的碳源为对羟基苯甲酸；全过程包括筛选―→扩大培养―→纯化―→鉴定。 [答案](1)选择培养基　对羟基苯甲酸　(2)利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，经富集培养，选择出能降解对羟基苯甲酸的微生物　(3)增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例　 (4)对羟基苯甲酸