微生物的实验室培养(上课用)讲解.ppt

4、实验结果的观察 结果： 酚红指示剂变_____，初步鉴定该细菌能够分解尿素 分析：细菌能分解尿素产生_____，使培养基呈碱性，氨增加pH升高，酚红由无色变为红色。 操作：在以_______为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂 尿素 （鉴别培养基） 红色 氨 5、实验结果的鉴定 一、纤维素的分解 纤维素 （多聚葡萄糖） Ｃ１酶 Ｃｘ酶 纤维二糖 葡萄糖苷酶 葡萄糖 与刚果红作用 红色复合物 不与刚果红作用 由纤维素酶分解（一种复合酶） 二、设计原理 1、土壤中获取菌种 选择纤维素丰富的环境 2、选择培养 配制以纤维素为唯一碳源的培养基 3、梯度稀释 为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？ 生物与环境相互依存，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高。 将滤纸深埋土壤中的作用？多深为宜？ 滤纸埋在土壤中使纤维素分解菌相对聚集，实际是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境；10cm左右。 4、将样品涂布到鉴别培养基上 5、挑选产生透明圈的菌落（刚果红染色法） 唯一碳源 按物理性质划分： 液体培养基 羧甲基纤维素钠 * * 二、无菌技术 （1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 （2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 （3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 （4）实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 例题2：下列实验方法及其结果合理的是 A．稀释的鸡蛋清溶液与蛋白酶混合后用双缩脲试剂检测会发生紫色反应 B．酒精溶液与重铬酸钾溶液混合后在沸水浴条件下会出现灰绿色 C．在植物组织培养中，可用酒精对外植体进行灭菌 D．用二苯胺试剂鉴定DNA时，在沸水浴条件下溶液呈蓝色 （双选） 1、常用消毒和灭菌方法 煮沸消毒法： 巴氏消毒法： 化学药剂消毒法： 紫外线消毒法： 灼烧灭菌 100℃；5-6min；部分细胞和芽孢 75℃，30min；80℃，15min；牛奶 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 70%乙醇，氯气 消毒 灭菌 概念 指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 常用方法 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法 灼烧灭菌法、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 适用对象 不耐高温的液体，日常用品，操作空间、空气动植物组织、手术用器材、塑料或玻璃器皿等 接种环、接种针、玻璃器皿，培养基等 灼烧灭菌 干热灭菌箱 高压蒸汽灭菌锅 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂（70%酒精等） 紫外线 针对不耐高温的液体 接种室、超净工作台 能耐高温的，需要保持干燥的物品 灼烧法 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 接种工具（接种环等） 吸管 实验操作者的双手 培养皿等玻璃器皿 培养基 1、消毒方法 2、灭菌方法 干热灭菌 计算?称量 ?溶化? 灭菌?倒平板 （参照教材） 三、实验操作 1、制备培养基 【例3】进行细菌接种培养实验时，以下哪个操作步骤是非必要的？ A．双手带上胶手套 B．接种前后都灼烧接种环 C．接种前后都灼烧菌种试管口和待接种斜面 试管口 D．要丢弃带菌培养基前，进行高压蒸汽灭菌 或加热灭菌 1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 刚刚不烫手时 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 灼烧灭菌，防止瓶口的微生物的污染 有关问题 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 3.为什么将平板倒置？ 2、纯化大肠杆菌 平板划线法 稀释涂布平板法 平板分离 由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，就是菌落。 根霉 曲霉 青霉 将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环_______ 在_______旁冷却接种环，并打开棉塞 将试管口通过火焰 .将已______的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 .将试管通过火焰，并塞上棉塞 火焰 冷却 三至五 灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的_______开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。 末端 烧红 将平板_____放入培养箱中培养。 倒置 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线