溶液各种配制讲解.doc

附录：常用试剂配制及应用 一、常用缓冲液、试剂的配制 碳酸盐缓冲液0.2 mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7） 0.2mol/L Na2CO3 (ml) 0.2mol/L NaHCO3 (ml) pH 0.2mol/L Na2CO3 (ml) 0.2mol/L NaHCO3 (ml) 9.2 4.0 46.0 10.0 27.5 22.5 9.3 7.5 42.5 10.1 30.0 20.0 9.4 9.5 40.5 10.2 33.0 17.0 9.5 13.0 37.0 10.3 35.5 14.5 9.6 16.0 34.0 10.4 38.5 11.5 9.7 19.5 30.5 10.5 40.5 9.5 9.8 22.0 28.0 10.6 42.5 7.5 9.9 25.0 25.0 10.7 45.0 5.0 磷酸缓冲液磷酸盐使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽NaH2PO4：pKa1＝2.12，pKa2＝7.21； Na2HPO4：pKa1＝7.21，pKa2＝12.32 另外，磷酸盐钾盐低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制十二烷基硫酸钠SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用钠而不能用钾，因为SDS会与钾生成难溶的十二烷基硫酸钾。磷酸缓冲液的优点为：①配制成的缓冲液；②适用pH；③受温度影响pH值变化较小；④pH影响较小，如0.1mol/L缓冲液稀释10倍pH变化小于0.1。磷酸缓冲液的缺点：①易与钙离子Ca2+）、镁离子Mg2+）及重金属离子生成沉淀；②某些生物化学过程，如对某些酶的催化程度的抑制作用NaH2PO4的pH值偏酸性，可用作pH4的缓冲液。 Na2HPO4的pH值偏碱性，pH10的缓冲液。pH＝6～8中性缓冲液NaH2PO4与Na2HPO4两种磷酸盐0.2 mol/L磷酸盐缓冲液（pH～） 0.2mol/L NaH2PO4 (ml) 0.2mol/L Na2H PO4 (ml) pH 0.2mol/L NaH2PO4 (ml) 0.2mol/L Na2H PO4 (ml) 5.7 93.5 6.5 7.0 39.0 61.0 5.8 92.0 8.0 7.1 33.0 67.0 5.9 90.0 10.0 7.2 28.0 72.0 6.0 87.7 12.3 7.3 23.0 77.0 6.1 85.0 15.0 7.4 19.0 81.0 6.2 81.5 18.5 7.5 16.0 84.0 6.3 77.5 22.5 7.6 13.0 87.0 6.4 73.5 26.5 7.7 10.5 89.5 6.5 68.5 31.5 7.8 8.5 91.5 6.6 62.5 37.5 7.9 7.0 93.0 6.7 56.5 43.5 8.0 5.3 94.7 6.8 51.0 49.0 8.1 4.2 95.8 6.9 45.0 55.0 8.2 3.0 97.0 磷酸盐缓冲溶液（Phosphate-buffered salinePBS) 磷酸盐缓冲液是在磷酸缓冲液基础上添加NaCl以维持溶液的渗透压，因此，PBS适用于做细胞缓冲液，常用PBS配制如下。 NaCl 8g KCl 0.2g Na2HPO4 1.44g KH2PO4 0.24g 在800ml蒸馏水中溶解，用HCl调节溶液的pH值至～7.4加水定容至1L，15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存。 Tris缓冲液 Tris的pH值偏于碱性，因此，通过添加HCl调节pH至所需值，Tris-HCl缓冲液的离子强度（mol/L）是专指Tris的浓度，如某一特定H的0.05 mol/L Tris缓冲液配制将50ml 0.1 mol/L Tris碱溶液与表所示相应体积（ml）的0.1 mol/L HCl混合，加水将体积100ml0.05 mol/L Tris缓冲液0.05 mol/L Tris缓冲液需0.1 mol/L HCl（ml)需0.1 mol/L HCl（ml)Tris盐缓冲液（TBS）： NaCl以维持溶液的渗透压，因此，TBS也适用于做细胞缓冲液，常用TBS配制如下。 8g NaCl、0.2g KCl3g Tris溶解800ml蒸馏水中，加入0.015g酚红并用HCl调pH至7.4用蒸馏水定容至1L，分装后在15psi（1.05kg/cm2）高压灭菌20min，室温保存。KCl及酚红。 Hank’s液 ’s Balanced Salt Solution)