第三章生药的鉴定方案.ppt

第三章 生药的鉴定 ?2. 红外分光光度法 一般用2.5～15mm（或按波数计为4000～667cm-1）红外区吸收光谱进行物质的定性、定量分析的方法。所用仪器为红外分光光度计。 ????红外光区的灵敏度和精密度较低，一般需数百mg的供试品进行测定。在此区域内，物质对光的吸收系分子中振动和转动能级的跃迁所引起；红外光谱（或称振转光谱）的特征性很强，特别是在7～15mm一段称为指纹区，吸收峰很多，而且尖锐，故主要用于物质的鉴别和分析结构。本法在牛黄、血竭、熊胆等的鉴别上，效果良好。 第三章 生药的鉴定 3.原子吸收分光光度法 是基于从光源辐射出的待测元素特征光波通过样品蒸气时，被蒸气中该待测元素的基态原子所吸收，测定辐射光强度减弱的程度，以求出供试品中待测元素含量的一种方法。原子吸收遵循一般分光光度法的吸收定律。比较标准品和供试品的吸收度，即可求得样品中待测元素的含量。所用仪器为原子吸收分光光度计。近年来用以测定生药中的微量金属元素的含量。 第三章 生药的鉴定 4、比色法 ????比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法。在可见光区（400～850nm），有些物质对光有吸收，有些物质本身并没有吸收，但在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后，可用此法测定。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，测定时需用标准品或对照品同时操作。常使用的仪器为可见分光光度计或比色计。比色法多用于生药的定量分析及理物常数的测定。 第三章 生药的鉴定 三、色谱法 色谱法又称层析法，是将中药进行化学成分分离和鉴别的重要方法。 常用的色谱鉴定方法有薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、纸色谱法、凝胶电泳、毛细管电泳等技术。其中TLC是生药理化鉴别中最重要的定性鉴别方法，HPLC和GC是最为常用的定量分析方法。 1、薄层色谱法： 是生药鉴定中最常用且简便、直观、经济的一种色谱法，样品点样展开后，可通过斑点的荧光或显色反应直接鉴定比较，也可通过扫描定性、定量分析，几乎适用于所有的动、植物类药材的鉴定。最常用的是硅胶薄层色谱法。 第三章 生药的鉴定 2、气相色谱法： 适合于挥发性成分或通过衍生化后能够气化的成分的定性、定量分析，具有灵敏度高、分离效率高等优点，特别是气相色谱-质谱-计算机联用技术的发展，对于富含挥发油类药材的鉴别，气相色谱已成为一种首选的方法。 第三章 生药的鉴定 3、高效液相色谱法： 具有柱效高、分离度好、重现性好等特点，配以不同类型的检测器，可对多种生药成分进行分析，尤其适合于具有紫外吸收的化合物的分析；一般常用于含量测定，但也可根据特征色谱峰和指纹图谱进行定性分析，特别是三维高效液相色谱（HPLC）的发展，使定性分析更为方便。 第三章 生药的鉴定 4、纸色谱法： 是一种分配色谱，可用于氨基酸、糖类等水溶性成分的分析。 5、凝胶电泳： 适合于肽类、核酸、多糖等大分子化合物的分析鉴定。特别是分子生物学的发展， DNA指纹图谱分析应用于植、动物的鉴定，与次生代谢产物的分析相比，更能反映物种的内在遗传变异规律。 第三章 生药的鉴定 四、化学指纹图谱 通常的化学指纹图谱是指采用光、色谱或其他分析方法建立的用于表征生药化学成分特征的图谱。一般为色谱指纹图谱，即将生药经过适当处理后，应用现代色谱技术并结合化学计量学及计算机方法，对生药所含化学成分的整体特征进行科学表征的专属性很强的图谱，最常采用的色谱方法是高效液相色谱法及薄层色谱法和气象色谱法。 第三章 生药的鉴定 指纹图谱的特点：整体性、模糊性 整体性：指纹图谱是重要化学成分整体的综合表达，不能孤立地看待其中某一个或某几个色谱峰，只有完整的图谱才能表达中药所含化学成分的全部特征 模糊性：指图谱中的大多数色谱峰所对应的化合物结构式不清楚的。 为保证指纹图谱的实用性，要求指纹图谱具有专属性和重现性，即指纹图谱应能够体现某一生药的特征，其结果可以重现，因此严格的方法学考察是必需的。 第三章 生药的鉴定 方法：通过对10批以上样品的分析，从中归纳出合格样品所共有的、且峰面积相对稳定的色谱峰作为指纹峰建构获得标准图谱，即由所有具有指纹意义的色谱峰组成的完整图谱。 色谱指纹图谱的综合参数：指纹峰的位置（保留时间和比移值）、强度（峰面积和峰高）或相对值（与选定参比峰的比值）。 结果判断：通过计算供试品图谱与标准图谱的相似度判断供试品合格与否。 第三章 生药的鉴定 五、定量分析与方法学验证 生药中化学成分的定量分析是评价生药质量的重要手段，对于保证生药的有效性和安全性意义重大。 目前常用的方法：紫外-可见分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法。 分光光度法主要用于定量分析生药中的大类成分，如总黄酮、总皂苷 色谱法用于定