第四章紫外可见吸光光度法概述.ppt

(一) 溶剂参比:当样品溶液中只有待测物质在测定波长下有吸收，其它共存物质均无吸收时，采用溶剂（通常为蒸馏水）作为参比溶液。 （二）试剂参比:当显色剂或其它试剂在测定波长处有吸收时，采用试剂作参比（不加待测物），相当于标准曲线系列的零（0）管；许多显色反应需采用试剂参比。 （三）试样参比 如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反应时，可以试样作参比（不能加显色剂） 如用硫氰酸盐为显色剂测钼时，取不加硫氰酸盐的样品溶液作参比，可消除共存Cr3+、Ni2+、Cu2+等有色离子的干扰。 4.4 分析条件的选择 （四）平行操作参比 用不含待测组分的样品，按照与样品测定相同的条件与样品平行操作，以此为参比溶液进行测定，称为平行操作参比。 例如在临床检验中，正常人的血液、尿液等不含待测组分的样品按相同的条件平行操作，所得的溶液即是平行操作参比。 4.4 分析条件的选择 4.5 定性及定量分析 将待测试样和标准品用相同的溶剂配成浓度相近的溶液，以相同的条件测定并绘制吸收光谱，然后比较两者的特征 如吸收峰数目、最大吸收波长（?max）、最小吸收波长（?min）、肩峰（?sh）、末端吸收、吸收峰的形状 等。 4.5.1定性分析 用紫外－可见吸收光谱及特征参数进行定性鉴别时，给出的仅是官能团的信息，有一定的局限性。当两种纯化合物的吸收光谱有明显差别时，可以肯定两者不是同一化合物。但当两种纯化合物的吸收光谱完全相同时，只能得出两化合物含有相同的官能团，有可能是同一物质，但不能以此确定是同一物质，必须结合其它的定性手段才能进一步确证。 4.5.2定量分析 4.5.2.1标准曲线法 配制一系列（一般5个）不同浓度的标准溶液，在待测物质的?max下，选择合适的参比溶液，在相同条件下分别测定各标准溶液的吸光度。以吸光度A为纵坐标，浓度为横坐标，绘制A－c曲线，即为标准曲线（standard curve），或称工作曲线（working cure）。或进行线性回归，求出回归方程，绘出回归直线以代替标准曲线。 A c cx Ax 4.5 定性及定量分析 标准溶液 （mg/25ml） 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.00 吸光度 0.000 0.240 0.491 0.712 0.950 1.156 例题：槐米中芦丁的含量测定，配置每毫升含芦丁对照品0.200mg的标准样品储备溶液。分别移取0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml与25ml容量瓶中，按样品溶液显色的同样方法显色，稀释至刻度，测定各溶液的吸光度制作标准曲线。并称得3.00mg样品，在相同条件下测得吸光度为0.845。求样品中芦丁的含量。 4.5 定性及定量分析 解：根据线性回归求得有关参数如下： a=0.0105，b=1.162，r=0.9997； 回归方程为：Y=0.0105+1.162C 4.5 定性及定量分析 使用标准曲线回归时需注意： 1、样品溶液与标准溶液的基体尽可能一致，保证它们的可比性； 2、标准曲线绘制时，至少要有五个点； 3、样品溶液与标准溶液必须在相同条件下（包括测定步骤、显色条件、仪器设备条件等）测定其吸光度； 4、标准曲线对仪器的要求不是很高； 5、标准曲线法适合批量样品的分析。 4.5 定性及定量分析 这种方法比较简便，适合个别样品的测定，但要求样品溶液与标准溶液的浓度相近，且在标准曲线的线性范围之内，标准曲线经过原点，这样才可获得准确的测定结果。 3.5.2.2直接比较法 当标准曲线过原点时，可用直接比较法。在相同条件下，制备标准溶液和样品溶液，分别测定两者的吸光度As和Ax，A=Kc,按下式计算样品溶液中待测组分的浓度cx。 4.5 定性及定量分析 例题：某有色物质X，摩尔质量为150g·mol-1，在λ=450nm处有一吸收峰，浓度为3.03mg/L的溶液，在2.00cm比色皿中吸光度为0.842。当用1.00cm比色皿， 吸光度为0.768时，求该100mL溶液中X的质量为多少毫克？ 解：根据As=2KCS，AX=KCX 4.5 定性及定量分析 4.5.2.3 双波长分光光度法 图a)：X,Y 组份最大吸收波长不重迭，相互不干扰，可以按两个单一组份处理。 图b)和c) ：X,Y 相互干扰，此时可通过解联立方程组求得X和Y的浓度： 其中，X,Y 组份在波长 ?1 和 ?2 处的摩尔吸光系数 ? 可由已知浓度的 X, Y 纯溶液测得。解方程组可求得 cx 及 cy。 4.5 定性及定量分析 4.5 定性及定量分析 等吸收双波长测量法 其方法是：先把一种组分的吸收设法消去，测定另一组分的浓度。 测定a组分时，选择a组分的最大吸收波长作测定波长?2，由A的峰顶