第18章经典液相色谱法概述.ppt

第十八章 经典液相色谱法 第一节 概述 经典液相色谱法：采用普通规格的固定相，常压输送 流动相的液相色谱法称～。 第二节 液-固吸附柱色谱（如M. Tsweet法） （一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）色谱条件的选择 （一）分离原理 （二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺 1. 硅胶（SiO2·H2O） 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 表面硅醇基存在形式： 表18-1 硅胶和氧化铝的含水量与活性的关系 硅胶吸附特性2：与极性物质形成氢键 2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 物质极性↑，吸附能力↑，k ↑，tR ↑ （三）流动相的选择 1. 被测组分性质（极性大小）： 烃＜ - - - - - - - - ＜羧酸，醇 判断物质极性大小的规律： ①基本母核相同，基团极性↑， 分子极性↑，吸附能力↑ 极性基团数↑，分子极性↑，吸附能力↑ ②分子中双键越多，极性↑， ，吸附能力↑ ③取代基空间排列：形成分子内氢键极性不形成 2. 吸附剂的活性： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂 3. 流动相的极性： 流动相极性↑大，对被测组分的洗脱能力↑大 “相似相溶”原则 ：根据组分性质、吸附剂的活性， 选择适当极性的流动相 常用的流动相极性递增的次序是： 石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜苯＜甲苯＜乙醚＜氯仿＜ 醋酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水。 4. 三者关系图示： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性 第三节　平面色谱法的分类和参数 分类 　　薄层色谱法TLC： 纸色谱法PC：分配色谱法 平面色谱参数 　 定性参数——比移值Rf 相平衡参数——K、k 分离参数——分离度R 1、定性参数 比移值(Rf值) 溶质移动距离与展开剂移动距离之比 Rf =L/L0 （定时展开） L为原点（origin）至斑点中心（质量重心）的距离 L0为原点至溶剂前沿（solvent front）的距离 ——类似保留时间（定距展开） 与组分及色谱条件有关 2、相平衡参数 分配系数K= Cs/Cm 容量因子 k= CsVs/CmVm K、k与Rf值的关系：　　　　　 1）K↑大，Rf↓小 2）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱） 3）Rf范围：0 Rf 1 Rf=0，K无穷大，组分在原点不动 Rf=1，K=0，组分斑点至溶剂前沿 Rf = 0.2——0.8（常用） 0.3——0.5（最佳） 影响比移值的因素 1）被分离物质的结构和性质 2）薄层板的性质 3）展开剂的极性 4）温度 5）展开槽内的展开剂蒸气饱和程度 重现性差，多用于定性 3、分离参数——分离度 分离度（R） 两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度（纵向直径）的比值 第四节、薄层色谱法 (thin layer chromatography；TLC) （一）概述 （二）吸附剂的选择 （三）展开剂的选择 （四）薄层板的制备 （五）定性与定量分析 （一）概述 1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2．操作过程：见图示 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量) 3．分离