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突变株A不能在一般培养基上生长的原因是 。突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是 。 【解析】(1)制备土壤浸出液时,为避免菌体浓度过高,需将浸出液进行稀释处理。(2)从物理性质方面来看,题图中的培养基属于固体培养基;从用途方面来看,该培养基属于选择培养基。该除草剂为含氮有机化合物,降解该除草剂的细菌可以以除草剂为氮源。故该培养基中除加入除草剂外,不能再含有其他氮源,以选择出能降解该除草剂的细菌。(3)在以该除草剂为惟一 氮源的培养基上,不能降解该除草剂的细菌(除具有固氮能力的细菌外)是不能生长的。(4)含一定量该除草剂的培养基不透明,形成透明圈是该除草剂被某些细菌降解的结果。(5)突变株A的生长依赖于营养物质甲,突变株B的生长依赖于营养物质乙。不添加营养物质甲和乙,二者混合培养时都能生长,最可能的原因是突变株A为突变株B提供了营养物质乙,突变株B为突变株A提供了营养物质甲。 答案:(1)稀释 (2)在无氮固体培养基中添加了该除草剂 (3)培养基中缺少这些细菌可利用的氮源 (4)氮气 该除草剂 (5)突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶 突变株A生长需要营养物质甲,突变株B可以提供;突变株B生长需要营养物质乙,突变株A可以提供 【互动探究】 (1)题中透明圈的大小代表了什么? 提示:降解该除草剂的细菌的分解能力。 (2)无透明圈的菌落不能分解该除草剂,此类微生物有什么特点? 提示:此类微生物为固氮微生物,可以利用空气中的氮。 考点二 微生物的纯化培养技术 1.原理 在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是纯化的细菌菌落。 2.微生物接种方法 (1)平板划线法:平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中。在线的开始部分,微生物往往连在一起生长,随着线的延伸,菌数逐渐减少,最后可能形成纯种的单个菌落。(如图所示) (2)稀释涂布平板法:10倍系列稀释操作。 ①将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌,并按101~106的顺序编号。 ②进行梯度稀释后,从菌落开始,每次取前面1 mL溶液注入到下一试管中混匀。(如图所示) ③进行涂布平板操作。 【高考警示】 (1)两种接种方法作用不完全相同:平板划线法和稀释涂布平板法都能使细菌纯化,但平板划线法不易分离出单个菌落,不能计数;稀释涂布平板法能使单菌落分离,便于计数。 (2)稀释涂布平板法的缺点:稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。 (3)平板划线法纯化大肠杆菌时不同阶段灼烧接种环的目的不同: ①第一次操作:杀死接种环上原有的微生物。 ②每次划线之前:杀死上次划线后接种环上残留的菌种,使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。 ③划线结束后:杀死接种环上残存的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 【典例2】从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是:采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。 (1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌种应从 环境中采集。 (2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,使其菌落中的数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择 的培养基,并在 条件下培养。 (3)接种前要对培养基进行 处理。在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在 条件下进行。 (4)如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图,请分析接种的具体方法。 获得图A效果的接种方法是 ,获得图B效果的接种方法是 。一同学用稀释平板法纯化土壤中的细菌时,发现培养基上的菌落连成一片,最可能的原因是 ,应当怎样操作才可避免此现象? 。 (5)如果探究温度对纤维素酶活性的影响,自变量是 ,应该保持 等不变(至少答两项)。 【解析】(1)筛选菌种应从适于目的菌种生长、繁殖的环境中寻找,故培养噬盐菌应从高盐环境中采集。 (2)富集培养时培养基及培养条件应能促进目的菌的生长、繁殖。 (3)微生物的分离及培养中必须保证无菌,包括培养基的灭菌和操作过程的灭菌等。 (4)纯化培养中接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法,前一种方法形成的菌落分布较均匀,后一种方法形成的菌落分布不均匀,先划线的部分菌落密集甚至相连,后划线的部分菌落分布稀疏。 (5)探究温度对酶活性的影响时,温度为自变量,酶活性为因变量,其他变量如底物和酶的用量、pH、反应时间等均为无关变量。 答案:(1)海滩等高盐 (2)以淀粉为惟一碳源 高温 (3
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