紫外分光光度法2总结.ppt

教学目标 熟悉紫外可见光谱法的定性分析方法。 熟练应用单组分定量分析方法。 熟练应用双波长法。 熟悉导数光谱法，了解计算分光光度法。 定性鉴别自学问题 用紫外可见光谱进行定性鉴别时可以只用样品和标准品的?max进行比较吗？为什么？ 当样品与标准品的紫外可见光谱完全相同时，可以确定两者为同一物质吗？ 定性鉴别 1.对比吸收光谱特征数据 ?max 、?min 、?sh、?、E1%1cm 2.对比吸光度（或吸光系数）的比值 3.对比吸收光谱的一致性 维生素B12的鉴别 维生素B12的吸收光谱有三个吸收峰，分别为278、361、550nm。它们的吸收度比值应为： A361nm/ A278nm=1.70~1.88 A361nm/ A550nm=3.15~3.45 纯度检查 1.杂质检查 根据光谱特征的变化或吸收峰?值的改变判断杂质存在。 2.杂质限量检查 （1）以某个波长的吸光度值表示 （2）以峰谷吸光度的比值表示 肾上腺酮（—）与肾上腺素（—）的吸收光谱 单组份的定量——吸光系数法 例1 肾上腺素中肾上腺酮限量检查的方法是：将肾上腺素试样用HCl液0.05mol/L制成2mg/mL的溶液，在1cm吸收池中，于310nm( =435)处测定吸光度A。规定A值不得超过0.05。求肾上腺酮的杂质限量。 单组份的定量——校正曲线法 单组份的定量——对照法 例3 为测定某溶液中铁的含量，精密称取0.4320g(NH4)Fe(SO4)2.12H2O(481.5),溶于水配成50.00ml标准铁溶液，吸取此溶液4.00ml,加磺基水杨酸显色后，稀释成50.00ml，测得A＝0.408。取未知溶液5.00ml稀释成25.00ml，再吸取稀释后的试样4.00ml在上述相同条件下显色后，稀释成50.00ml，测得A＝0.413。试计算未知试样中铁含量(g./L)。 一元弱酸离解常数的测定 配制分析浓度为c的弱酸溶液，分别调节溶液pH，在选定的波长处测定各溶液的吸光度，则： 导数光谱法定义 导数光谱法特点 导数光谱法定量分析 定量分析的依据： A=CE=C f(λ) dA/dλ=C dE/dλ d2A/dλ2=C d2E/dλ2 … … … … 定量方法：工作曲线法或标准对照法 导数光谱法峰高测定方法 小 结 习 题 2，4，5，7，8，10，11，12，15。 * * 220 260 300 340 0.2 A 0.4 ?(nm) 220 260 300 340 0.2 A 0.4 ?(nm) 220 260 300 340 0.2 A 0.4 ?(nm) 三种甾体激素的紫外吸收光谱 醋酸泼尼松 醋酸可的松 醋酸氢化可的松 0 260 280 300 150 E1%1cm 300 ?(nm) 320 450 例2 称取维生素C 0.0500g , 溶于100ml的0.005mol/L的硫酸溶液中，再量取此溶液5.0ml稀释至250ml，取此溶液于1cm吸收池中，在?max245nm处测得A值为0.551,求样品中维生素C的百分质量分数。 245nm=560 0 50 100 150 0.2 A 0.4 C(?g/ml) 200 0.6 0.8 Ax Cx 1.配制标准溶液与样品溶液 2.分别测定上述溶液的吸光度 3.作标准曲线 4.从图中求出样品浓度 一元弱酸离解常数的测定 例：维生素B6的Ka测定 100.0 50 0 0 10.0 E 100.0 0 25 2 10.0 D 100.0 0 25 4 10.0 C 100.0 0 25 6 10.0 B 100.0 0 0 10 10.0 A 总体积(ml) pH7磷酸盐缓冲液体积(ml) 0.05mol/LNaAc体积(ml) 0.1mol/LHCl体积(ml) VitB6储备液体积(ml) 溶液 A ? ?1 ?2 a b 混合组分吸收光谱相互重叠情况示意图 A ? ?1 ?2 a b 混合组分吸收光谱相互重叠情况示意图 A ? ?1 ?2 a b 混合组分吸收光谱相互重叠情况示意图 A ? ?1 ?2 a 等吸收双波长消去法示意图 b ΔA A ? ?1 ?2 a 等吸收双波长消去法示意图 b ΔA 一阶 二阶 三阶 零阶 将吸光度信号转化为对波长的导数信号的方法。导数光谱是解决干扰物质与被测物光谱重叠，消除胶体等散射影响和背景吸收，提高光谱分辨率的一种数据处理技术。 10ppm苯的乙醇液 1ppm苯的乙醇液 纯乙醇 1ppm苯的乙醇溶液， 二阶导数光谱 1ppm苯的乙醇溶液， 四阶导数光谱 选 择 性 及 灵 敏 度 均 提 高 基线法（或正切法）：相邻峰(极大或极小)切