第十一章 固相膜免疫测定.ppt

1.HRP催化的反应式为DH2+H2O2→D+2H2O,何者习惯上被称为底物 ( ) A.DH2 B.H2O2 C.D D.H2O 2.OPD经与HRP反应后,再用H2SO4终止反应后呈 ( ) A.橙黄色 B.棕黄色 C.黄色 D.蓝色 3、目前ELISA中应用最广泛的底物是 A.OPD B.TMB C.5-ASA D.ABTS （ ）;4.ELISA双抗体夹心法是 ( ) A.酶标记特异抗体用于抗原的检测B.先将待测抗原包被于固相载体C.标记一种抗体可检测多种抗原D.能用于半抗原的测定E.属竞争结合测定 5.捕获法主要用于何种物质的测定 A.IgM B.IgG C.IgA D.IgD ( );6、下列哪种方法用一种标记物可检测多种被测物 ( ) A.ELISA双抗体夹心法 B.ELISA竞争法C.ELISA间接法 D.ELISA捕获法E.放射免疫测定法 7.关于ELISA竟争法,正确的是 ( ) A.用于检测抗原 B.被测物与酶标记物的免疫活性各不相同 C.被测物多则标记物被结合的机会少 D.待测管的颜色比参照管的淡表示被测物量少 E.结合于固相的酶标抗原量与样品中被测抗原量成正比 ;1.每个亲和素能结合多少个分子的生物素A.1 B.2 C.3 D.4 2.生物素分子中与亲和素结合的主要部位是 ( ) A.噻吩环 B.咪唑酮环 C.苯环 D.羰基 E.-NH- 3.在用生物素标记酶时,酶活性会降低的是A.HRP B.葡萄糖氧化酶 C.β-Gal D.AP ( );第十一章;掌握：免疫印迹试验 熟悉：胶体金免疫技术的方法学种类与原理 了解：胶体金与免疫金的制备、其他膜载体免疫分析技术;一 概述 二 免疫层析试验 三 免疫渗滤试验 四 斑点酶联免疫吸附试验 五 免疫印迹试验 六 影响固相膜免疫试验的主要因素 七 固相膜免疫分析技术的临床应用 ;;第二节 免疫层析试验;毛细作用 是指浸润液体在细管里升高的现象和不浸润液体在细管里降低的现象;第二节 免疫层析试验; 二、 测定模式（一）胶体金免疫层析试验;;; 三 技术要点 操作要点： （1）将试剂条标记线一端浸入待测标本中2-5s,或在标本加样处加一定量待检标本,平放于水平桌面上 （2）在5-20分钟内观察结果 结果判断 夹心法：阴性:1条棕红色指控条带 阳性:出现2条棕红色条带 无棕红色条带出现为试剂失效 竞争法：阴性:出现2条棕红色条带。阳性:1条棕红色指控条带 ; 第三节 免疫渗滤试验;;技术要点：;;技术要点： 1、抗原包被 NC膜吸附力强，包被后封闭。 2、抗原抗体反应 抗原抗体反应后再加二抗 3、确定酶结合物最佳稀释度 阴性样品不显色，阳性显色最强时的酶结合物稀释度 4、显色反应 pH值5.8-6.0时反应最灵敏 强阳性蓝黑色斑点 弱阳性淡绿色半点;方法学评价： 1、NC吸附力强， 灵敏度较ELISA高6～8倍； 2、可同时检测多种抗体； 3、操作简便不需特殊仪器设备 4、吸附抗原（抗体）或已有结果的NC膜可长期保存，不影响期活性。; 第五节.免疫印迹试验 （immunoblot test ,IBT）; 二 Western blot技术要点 : 1.抗原印迹与包被 ①（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳） ②电转移 2.抗原抗体反应 （间接法） 3.检测 ;SDS 抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷，在聚丙烯胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带） ;;电转移 将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，选用低电压（100V）和大电流（1-2A），通电45min转移即可完成。此分阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。 ;酶免疫定位 将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。阳性反应的条带清晰可辨，并可根据SDS加入的分子量标准，确定各组分的分子量。 ;;;（三）方法学评价： 1、特异性强 2、吸附蛋白