1微生物的实验室培养2分解.ppt

* 课题1 微生物的实验室培养 1.提供营养和条件 2.防止污染 练习 1.获得纯净培养物的关键是 A 将用于微生物培养的器皿，接种用具和 培养基等器具进行灭菌 B 接种纯种细菌 C 适宜环境条件下培养 D 防止外来杂菌的入侵 D 　　2. 下面对灭菌的理解不正确的是(　　) 　　A. 防止杂菌污染　　B. 消灭杂菌 　　C. 培养基和发酵设备都必须灭菌 　　D. 灭菌必须在接种前 B 3.外科手术器械和罐头食品的处理，要以能 够杀死什么为标准 A 球菌 B 杆菌 C 螺旋菌 D 芽孢 D 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 四.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板： 培养基、培养皿 倒平板 约50℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤： →称量→ → →倒平板。 (2)倒平板的过程： ①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手 。 ②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过 。 ③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，左手立刻 。 ④待平板冷却凝固后，将平板 放置，使皿盖在下、皿底在上。 计算 溶化 灭菌 拔出棉塞 火焰 盖上皿盖 倒过来 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发， 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 单个 或少数菌体 2.特征： 大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。 3.功能： 1.定义： 菌落 鉴定菌种的重要依据 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 肺炎双球菌 四.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌： ⑴平板划线法： 菌种 划3个平板 1个不划线 1.接种： 接种环 防止划破培养基 （重复实验） （空白对照） 外焰 冷却 试管口通过火焰 分散成单个细胞, 形成单个菌落 平板划线法 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。 1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： 菌液 微量 移液器 ⑵稀释涂布平板法