南开大学基因操作原理第二章汇总.ppt

* 第二章 安 全 防 护 * 1.概念 2.一些国家基因操作安全规则 3.美国重组DNA研究修改条例 * 1、概念 生物危害（Biohazard) 生物伦理（Bioethics) 危险度 = 生物材料危险性 ×操作方法危险性 ×操作量 ×操作时间 ×操作次数 * * 3、NIH重组DNA研究修改条例的主要内容 1）物理防护 四个等级： P1P2P3P4（BSL, BL） (Physical Containment Level) P1级（最低级）（一般微生物实验室） （1）无特殊防护设备，实验工作在开放式工 作台上进行； （2）不与其它建筑物隔开，允许公众进入； （3）要严格执行标准的微生物实验造作规程，如操作时门窗关闭；工作台消毒；不用嘴吸移液管，至少用棉花塞，再用嘴吸；禁止在实验室吃喝吸烟等等。 * P2级实验室(低级)(病原微生物实验室) (1）设有负压工作区(生物安全柜); (2）限制外人进入; (3）不准穿工作服到室外,更不能到餐厅,其它同P1。 * P3级实验室（中级）严格的病原微生物实验室） （1）与向一般公众开放的地区隔开； （2）向实验室提供定向气流，排出的气流则释放到大气，防止重新进入大楼（排出的空气不准再循环）； （3）一般实验均应在生物安全柜内进行； （4）实验室门口标志生物危险信号； （5）严禁用嘴吸移液管； （6）工作时带手套等等，其它同P1 ，P2。 * * P4实验室（高级）（可防止微生物逃出室外，密闭的严格的病原微生物） （1）与其他建筑物严格隔离，应是单独建筑物； （2）密闭，单独使用的定向气流通风系统； （3）进出实验室应经更衣室和淋浴室，等等。 其它同P1,P2,P3 * 2）生物防护 根据载体-受体系统分级，以E.coliK12作受体的情况下，生物防护分三级，表示为：EK1EK2EK3。 （1） EK1级：一般常用的载体受体系统，如质粒，入作载体， E.coli作受体。 （2）EK2级：用遗传学方法构建的具有高级生物防护功能的载体-受体系统，在非许可的条件下，即使重组DNA感染非特定受体，一定没有活性（如果有活性，一般不会超过10-8）一般受体为r-m-su＋，载体如λ，一般携带am突变。 （3）EK3级：EK3级系统单独用于动物体内实验（制定该条例时，尚无EK3级载体-受体系统。 * 3）重组实验采用防护等级规定 （1）真核DNA重组 a.灵长类 P3+EK3 or P4+EK2 b. 哺乳类 P3+EK2 c. 鸟类 P3+EK2 d.低等真核生物 能产毒素的 P3+EK2 一般者 P2+EK1 e. 植物 P2+EK1 (携带病原体的，P3+EK2) * （2）原核DNA重组： 根据供体菌的致病与否，确定防护等级； 一般潜在危险的病原体： P2+EK1 中等程度病原体（伤寒沙门氏菌，痢疾志贺氏 菌，霍乱弧氏军等）： P2+EK2 * （3）其它 ①动物病毒 P4+EK3 或 P3+EK3 （很严格，因为动物病毒 也包括感染人的病毒） ②植物病毒 P3+EK1 P2+EK2 ③真核细胞器DNA P3+EK1（灵长类线粒体） P2+EK2（灵长类线粒体） P2+EK1（其他真核线粒体，叶绿体） * 4）举例：（EK2级防护） Charon Phage的安全特征（生物防护） （1）免疫区缺失 免疫区缺失使其不能维持溶源 化状态，也就是可以有效的杀死感染细胞 （Charon 4A则无int和att位点）； （2）N+ N为野生型，为溶源化的主要障碍，促 使S,R基因表达，杀死细胞； （3）△Nin 缺失 Nin 即不依赖 N基因突变，△Nin 使N基因功能正常； * （4）am突变 使之只能在su+宿主中增殖， 在自然界中su+菌株是罕见的； （5）限制-修饰系统：（只可在r-m-宿主中扩增） 可在非修饰菌株中增殖，从