餐饮具的微生物检验技术.ppt

消毒后食饮具的微生物检验技术 1.2.2 复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 ℃±1℃培养48 h±2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 1.2.3 大肠菌群最可能数（MPN）的报告 按1.2.2 确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见GB4789.3-2010附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。 1.2.4 MPN表(GB4789.3-2010附录B) 表B 大肠菌群最可能数.doc 沙 门 氏 菌 属 简 介 沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关的革兰氏阴性、需氧性、无芽孢杆菌。本菌属种类繁多，抗原结构复杂，现已发现3000多个血清型，我国已发现血清型近200个。 形态特征： 革兰氏阴性，大小为1~3×0.4~0.9μm的两端钝圆的短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和雏沙门氏菌以外，都有周身鞭毛，运动力强。 沙门氏菌检验程序 3.2.2 操作步骤(1 )前增菌无菌操作将样品转至 500 mL 锥形瓶中，于 36 ℃±1 ℃培养 8 h～ 18h。(2) 增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于 10 mL TTB 内，于 42 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。同时，另取 1 mL，转种于 10 mL SC 内，于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。(3)分离培养分别用接种环取增菌液 1 环，划线接种于一个 BS 琼脂平板和一个 XLD 琼脂平板（或 HE 琼脂 平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于 36 ℃±1 ℃分别培养 18 h～24 h （XLD 琼脂平板、HE 琼脂 平板、沙门氏菌属显色培养基平板） 或 40 h～48 h （BS 琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落, 各个平板上的菌落特征见表 1。 反应序号 A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。 反应序号 A3：补做 ONPG。ONPG 阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒 沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。  3.2 金黄色葡萄球菌检验 3.2.1 检验程序 3.2.2 增菌和分离培养(1)增菌: 将上述样品匀液于 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在 7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生 长。 (2)分离培养:将上述培养物，分别划线接种到 Baird-Parker 平板和血平板，血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。 Baird-Parker 平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h 或 45 h～48 h。 (3)菌落特征:金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker 平板上，菌落直径为 2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为 淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、 金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固 酶试验。 3.2.3 鉴定 (1)染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5m～1m。 (2)血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到 5 mL BHI 和营养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。  取新鲜配置兔血浆 0.5 mL，放入小试管中，再加入 BHI 培养物 0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置 36 ℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌 株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培养 18 h～48 h，重复试验。 3.3 溶血性链球菌检验 3.3.1 检验程序 3.3.2 操作步骤 (1)增菌培养 ?? 将样液吸取5 mL，接种于50 mL葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线接种子血平板。如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36℃士l℃培养24 h，接种血平板。 （2）形态与染色 血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5mm～0.75 mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2 mm～4 mm界限分明、无色透明的溶血