08第八章真菌毒素的检验详解.ppt

（1）酶联免疫吸附法-竞争抑制法测AFB1 试剂：TMB，30%H2O2，牛血清白蛋白，吐温-20 抗体：抗AFB1的特异性单克隆抗体 包被抗原：AFB1与载体蛋白的结合物 酶标二抗： 缓冲液：磷酸盐缓冲液、终止液1mol/L的硫酸 AFB1标准溶液： 步骤： 1.提取：10g样品+50ml乙腈-水 滤纸过滤 BSA洗液稀释 2.测定：包被抗原包被酶标微孔板 洗液洗去多余抗原 加AFB1标准溶液 加稀释抗体（37度1.5h) 洗液洗3次后，加酶标二抗（ 37度培养2h） 反复洗后加底物溶液 加终止液 （包被—加样---加酶标抗原和待测抗原---加底物显色—终止反应 （显色原理对照管由于只加酶标抗原，与固相抗体充分结合，故分解底物显色深；测定管的显色程度则随待测抗原和酶标抗原与固相抗体竞争结合的结果而异。如待测抗原量多，竞争性地抑制酶标抗原与固相抗体结合，使固相上结合的酶标抗原量减少。 固定OD值 微孔板 微 孔 表 面 情 况 AFB1包被抗体 . （2）赭曲霉毒素 毒性：主要对肾产生危害，造成肾肿大，当浓度超过5mg/kg时，对肝脏组织和肠道产生破坏，引起肠炎等。 特性：无色结晶化合物，易溶于极性溶剂和稀的碳酸氢钠水溶液肿，微溶于水，在紫外光照射下，呈绿色荧光，该化合物稳定，在乙醇中置冰箱避光保存一年以上而不破坏，但在谷物中随时间延长而降解。 存在于：粮谷物、大豆、葡萄及葡萄酒、咖啡、可可和巧克力、中草药、调味料、啤酒等。 检测方法：液相色谱法、薄层层析法 （3）杂色曲酶毒素 毒性：引起肿瘤 污染：小麦、大麦、玉米、花生、大豆、咖啡豆、火腿、奶酪等。 易溶于氯仿、苯、吡啶、乙睛和二甲基亚砜，微溶于甲醇、乙醇，不溶于水和碱性溶液。在紫外线照射下，具有砖红色荧光。 检测方法：薄层法，紫外分光光度计测定 （4）伏马菌素 自然界中最为普遍，毒性强，损伤肝肾功能。 白色粉末，易溶于水、甲醇、乙睛等溶剂中，在甲醇溶液中不稳定，在乙睛水溶液中非常稳定。 检测方法：高效液相色谱法 . （5）单端孢霉烯族化合物 头孢菌、镰孢菌、木霉菌等。 侵害玉米、小麦、大米、燕麦、大麦等。 无色结晶、在常温下非常稳定，难溶于水，溶于极性溶剂，在烹调等加热过程中不会被破坏，在紫外光下不显荧光。但T-2毒素在紫外光下产生一种具有蓝色荧光物质 检测方法：薄层法 （6）玉米赤霉烯酮 禾谷镰刀菌、黄色镰刀菌、木贼镰刀菌 具有类似雌激素的作用，可与雌激素受体结合而影响细胞核的雌激素转录，刺激含雌激素受体的乳腺癌细胞的增长。 特性：是一种白色结晶化合物，不溶于水、二硫化碳禾四氯化碳，微溶于石油醚（30－60），溶于碱性溶液、苯、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙睛和乙醇等。耐热性强，大于110度才能被破坏。 易受污染：大麦、小麦、燕麦、稻谷、蚕豆、甘薯、甜菜、芝麻等、虫害、潮湿气候贮藏不当可诱发产生。 分析方法：高效液相色谱法 （7）棒曲霉毒素 苹果青霉、巨大曲霉 毒性：是一种免疫抑制剂，有致癌、致畸等 污染：大麦、小麦、面包、香肠、水果（香蕉、菠萝、葡萄等），在腐烂的苹果中较高。 分析方法：反向高效液相色谱法 主要内容 1.概述 2.真菌毒素分类 3.真菌毒素检测基本步骤 1.概述 真菌毒素--由真菌生产的有毒代谢产物。具有毒性、致癌性、致突变型和致畸性等。“毒蘑菇、迷神麦、醉谷病” 真菌毒素的危害： （1）引起粮食作物的病害和产品腐败变质； （2）对人类和动物健康产生威胁。 2.真菌毒素分类 按产生菌可分为：曲霉毒素类、青霉毒素类、镰刀菌毒素类等。水活度（Aw对真菌生长和产毒影响较大。 真菌毒素毒性： （1）致DNA损伤，有的致癌； （2）细胞毒性，有的破坏质膜和细胞酶的作用 常见的真菌性食物中毒：黄曲霉毒素中毒、黄变米或灰变米中毒，赤霉沼渣粉中毒等。 3.真菌毒素检测基本步骤 1.采样和样品的准备 （1）采样的地点 根据分析目的的不同确定采样地点，如：农田、仓库、加工厂、运输工具、零售商和医院等。 （2）采样方法 1）静态样品的采集 静态样品：麻袋、箱柜和车厢等容器存放分样品均属静态样品。 采样工具：顶端尖锐的长柄采样钎子。 采样数量：小批量时采1/4；大批量时为整批麻袋数 2）动态样品的采集 用商品化的十字交叉切分自动采样器 （3）采样量 采大样，按四分法对角连续多次分样缩减至1－2kg，最后取代表样全部粉碎。 美国农业部USDA的方法：成批样每批取3份大样，每份22kg。 实验室分析用的样品为1－5kg。 2.提取 1.提取溶剂 溶剂的选择取决于待测毒素的种类、毒素性质、