液相色谱仪常见故障排除.doc

液相色谱仪常见故障排除 HPLC故障排除 症状类型 可能的原因 解决方案 基线噪声大 随机性－ 污染物积聚冲 冲洗柱；净化样品；使用HPLC 级溶剂 连续性－ 检测器灯故障 更换紫外灯（寿命为1000 小时） 偶然性－ 外部电气干扰 使用LC 系统专用稳压器 样品量过大 进样量应为流动相进样量的1/6 双峰 样品量过大 进样量应为流动相进样量的1/6 进样溶剂过强 使用较弱的进样溶剂或流动相 滤芯堵塞 更换并使用0.5 μm 孔隙率的在线过滤器 柱有空隙或气沟 用玻璃珠或填料填充空隙；重填柱 进样器流路不通畅 更换进样器转子 柱头有空隙 使用填料或玻璃珠填充柱顶部 柱上样品超载 使用更高负载量的固定相 增加色谱柱内径 减少样品量 单峰－ 存在干扰性组分 净化样品；预分离 拖尾峰 开始出双峰 请参见双峰 存在未扫的死体积 减少接头的数量 确保进样器密封垫紧密 确保接头正确固定 碱性化合物－ 硅醇相互作用 换成聚合物固定相 碱性物质－ 硅醇相互作用 使用更强的流动相或添加竞争碱（例如，三甲胺 硅胶基－ 柱降解 使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻 峰展宽 进样量过大 降低进样溶剂的强度以集中溶质 进样阀中的峰扩散 在进样前/后引入气泡以减少扩散 数据系统的采样速率过低 增大采样 检测器时间常数低 调节时间常数使之与峰宽匹配 流动相粘度过高 提高柱温 检测器池容积过大 使用尽可能小的池容积（系统中无热交换器） 注射器体积过大 减少进样量 保留时间长 使用梯度洗脱或较强的流动相 压力波动 单向阀泄漏 更换单向 泵密封垫泄漏 更换泵密封 微粒积聚 过滤样品；在线过滤器；过滤流动相 压力渐增 微粒积聚 过滤样品；在线过滤器；过滤流动相 水/有机系统－ 缓冲液沉淀 测试缓冲液-有机混合物；确保兼容性 保留超出总渗透体积 体积排阻－ 特异性相互作用 添加流动相改性剂或更改溶剂 保留时间不断变动 柱温不断变化 使柱恒温；绝缘；保证实验室温度恒定 平衡时间不足以适应梯度洗脱要求，或等度洗脱流动相起变化 确信在溶剂改变或梯度结束后至少10 个柱容积通过色谱柱 流动相组分选择性蒸发 减少氦气的剧烈脱气；保持溶剂贮器盖好；制备新的流动相 缓冲能力不足 用 20 mM 浓度的缓冲液 在线流动相混合不一致 保证梯度系统输送恒定组成；与手动制备流动相核对 污染积聚 冲洗色谱柱以去除污染物 最初几次进样— 吸附在活性部位 用浓样品进样冲洗柱，使其处于正常状态 保留时间逐渐缩短 流速在增加 检查泵以确保正确；否则需重调 柱上进样超载 减少样品 键合固定相的流失 保持流动相pH 值在2-8.5 间 保留时间逐渐增加 流速在减慢 解决液流中的漏液现象，更换泵密封垫，检查泵的涡流和气泡 硅胶填料的活化点 使用流动相改性剂 键合固定相的流失 保持流动相pH 值在2-8.5 间 流动相组成在变化 确保流动相容器盖好 硅胶填料的活化点 流动相中加竞争碱 硅胶填料的活化点 固定相用更高覆盖度的填充料 灵敏度问题 峰位于检测器线性范围之外 稀释或浓缩使之处于线性区内 最初几次进样—样品在样品池或柱中被吸附自动进样器 流路阻塞 用浓样品处理样品池/柱 自动进样器流路阻塞 检查流量情况，确保无阻塞现象 进样器样品定量管未充满 确保样品池中已充满样品 在样品制品时有关的样品流失 用内标法在制备样品，优化样品制备方法 柱平衡时间减慢（离子对现象） 长链离子对试剂平衡时间慢 使用较短的烷链试剂