3.1.1.1=细菌形态学检查解说.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 肉毒梭状芽孢杆菌 鞭毛的观察 鞭毛染色法 细菌鞭毛极细，直径一般为10-20nm，鞭毛染色法的基本原理即在染色前用媒染剂处理，让媒染剂沉积在鞭毛上，使鞭毛加粗，然后再进行染色。 常用的媒染剂由单宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。 电镜观察 鞭毛着生情况 群体特征-------培养特征 细菌的培养特征包括以下内容： 在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。 在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。 半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。 菌落特征 菌落的大小 形态：点状、圆形、丝状 、不规则形 、假根状、纺锤状 隆起程度：扁平、隆起、低突起、高突起、乳头状等 边缘：整齐、不整齐 表面状态：光滑、皱褶、颗粒状、同心圆状等 表面光泽：闪光、不闪光、有金属光泽 质地：粘、脆 颜色：乳白色、金黄色等 透明度：透明、半透明、不透明 菌落（colony ）-----------细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体。 产色素的细菌 枯草芽孢杆菌菌落 粘质沙雷氏菌的菌落特征 铜绿假单胞菌的菌落特征 大肠杆菌在普通细菌培养基上的菌落特征 大肠杆菌在麦康凯琼脂平板上的粘稠菌落特征 麦康凯琼脂培养基 成分:　　 蛋白胨　　　　　　　　　　 17g　　 脙胨　　　　　　　　　　　 3g　　 猪胆盐(或牛、羊胆盐)　　　 5g　　 氯化钠　　　　　　　　　　 5g　　 琼脂　　　　　　　　　　　 17g　　 蒸馏水　　　　　　　　　　 1000mL　　 乳糖　　　　　　　　　　　 10g　　 0.01%结晶紫水溶液　　　　　10mL　　 0.5%中性红水溶液　　　　　 5mL 麦康凯琼脂培养基 制法1.将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL蒸馏水中加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。2.临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。 注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。 大肠杆菌在血平板上的菌落特征 金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特征 细菌群体培养特征 液体培养基生长特性 放线菌菌丝 放线菌菌丝 光学显微镜下的链霉菌菌丝 放线菌无性孢子的观察 无性孢子 孢子丝通过横隔分裂产生 孢子丝通过凝聚分裂产生 孢囊孢子：孢子囊 分生孢子： 节孢子： 放线菌（链霉菌）横隔孢子 放线菌孢子 放线菌（链霉菌）孢子 放线菌菌落特征及液体培养特征 菌落一般呈圆形，放射状。 菌丝缠绕紧密，形成小而不蔓延，未分化形成孢子丝前，类似细菌的菌落，光滑、粘实，孢子的形成会使菌落干燥、多皱，由于基内菌丝长在培养基内，菌落不易被挑起。 菌落正反面往往呈现不同颜色。 液体培养，常在管壁形成膜状菌落或沉降于管低，而不使培养基浑浊。 链霉菌菌落 放线菌菌落 放线菌菌落 * * * * * 细菌形态学检查 使用工具-----显微镜 显微镜：光学显微镜 所用放大倍数：10×100＝1000 所用镜头：油镜头 镜油：香柏油或石蜡油 香柏油折光率（n＝1.515）与玻片折光率（n＝1.52）接近 显微镜使用完毕须擦拭镜头。 透射电子显微镜 扫描电子显微镜 细菌个体形态观察 细菌形态、大小、排列方式 球菌排列方式 金黄色葡萄球菌的透射电镜照片 金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片 炭疽杆菌 不染色标本检查 应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式 常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映光法 压滴法 载玻片 细菌悬液 盖玻片 悬滴法 镜检 染色标本的检查 染色方法的种类 单染法:采用一种染料染色 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。 染色标本检查的基本程序 涂片－→干燥－→固定－→染色 ★涂片方式 ★干燥的方法 ★固定的方法、目的 ★染料种类：碱性染料、酸性染料、中性染料，碱性染料最常用 复染法基本程序 初染－→媒染－→脱色－→复染 革兰染色法（Gram染色） 染液组成： 结晶紫染液、 路哥氏碘液、95％乙醇、稀释复红 染色方法： 结晶紫 初染 路哥氏碘液 媒染 95％乙醇 脱色 稀释复红 复染 1分钟 30S～1min 1分钟 影响革兰染色的关键步骤是脱色 革兰染色结果 紫色－－革兰阳性菌 红色－－革兰阴性菌