血红蛋白的提取(好)汇编.ppt

阅读P64回答： 1、凝胶色谱法利用的是蛋白质的哪个性质？ 2、该方法中哪种物质是关键？如何起到分离作用？ 阅读P66回答 1、电泳方法有哪些？本书采用的是哪种？ 2、SDS的作用？ 观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图5-18），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 三、结果分析与评价 1、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？ 2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。 3、你能观察到蛋白质的分离过程中红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？ 作业 完成《血红蛋白的提取和分离》学案巩固1、巩固2、例1；随堂达标检测1、3；活页1、3、5、7 5月15日 作业 完成《血红蛋白的提取和分离》学案全部 5月16日 教学反馈 1．凝胶色谱法是根据（ ）分离蛋白质的有效方法。 A分子的大小 B相对分子质量的大小 C带电荷的多少 D溶解度 2．缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（ ）基本不变。 A温度 B pH C渗透压 D氧气浓度 3．电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（ ）的电极移动。 A相同 B相反 C相对 D相向 4. 哺乳动物和人的成熟的红细胞中的（ ）与氧气的运输有关。 A血红蛋白 B肌红蛋白 C肌动蛋白 D肌球蛋白 B B B A 5．血液由血浆和各种血细胞组成，其中（ ）的含量最多。 A白细胞 B血小板 C红细胞 D淋巴细胞 6．为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂（ ）。 A. NaCl B.甲苯 C.蒸馏水 D.柠檬酸钠 7．将搅拌好的混合液转移到离心管中，离心后，可以明显看到试管中的溶液分为4层， 其中第3层是（ ） A无色透明的甲苯层 B脂溶性物质的沉淀层 C血红蛋白的水溶液 D其他杂质的暗红色沉淀物 C D C 8、一分子血红蛋白最多可携带的 O2分子数和CO2分子数分别是 A 4、2 B 4、4 C 2、1 D、1、1 9、记住样品处理中的血红蛋白溶液离心后分层顺序自上而下是： 有机溶剂-----脂类物质-----血红蛋白溶液------红细胞破碎物沉淀 诊断方法：1、临床表现2、遗传史3、红细胞形态4、血红蛋白电泳分析 直接 原因 根本 原因 专题5 课题3 蛋白质分离的原理： 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 一、基础知识 （一） 凝胶色谱法 2.凝胶： 大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。 1.原理： 3.凝胶色谱法分离蛋白质的具体过程 ①______________ 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较___，移动速度较____; ②_______________的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较___，移动速度较____。 相对分子量较小 长 慢 相对分子量较大 短 快 （二）缓冲溶液 1.作用: 3.缓冲溶液的配制: 4.在本课题中使用的缓冲液是:磷酸缓冲液 如何证明凝胶色谱法获得的蛋白质是目的蛋白？ 2.组成： 如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等 （三） 电泳： 1.概念： 带电粒