诊断酶学(第五版)12试题.ppt

（八）临床酶学测定的标准化 1. 标准化途径 1．使用推荐方法和参考方法 2．使用公认的酶校正物或酶参考物 2. 酶活性浓度测定的参考系统 1．建立原级参考方法 2．制备原级参考物 3．建立参考实验室网络 （一）测定原理 （二）免疫化学测定的优缺点 优点主要有：①灵敏度高②特异性高 ③能用于一些不表现酶活性的酶蛋白 ④特别适用于同工酶的测定 局限性主要有：①制备足够量的提纯酶作为抗原和 具有免疫化学性质的抗血清较困难 ②测定步骤多，操作繁琐 ③测定成本高 二、酶质量测定 三、同工酶检测 (一)电泳法---琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰 胺凝胶电泳、等电聚焦电泳、 毛细管电泳 ● 用电泳法进行同工酶分析时，如显示的 区带数与同工酶数不一致时，要特别注意 巨分子酶的存在。 (二)层析法 血 清 LD 电 泳 图 谱 分 析 正常和病理状况时血清CK同工酶谱 (三)免疫分析法 免疫抑制法 利用同工酶的一种亚基与相应的抗 体结合后，酶活性受到抑制，测定加与不加抗体前后 样品中酶活性的变化，可以计算出该型同工酶的活性。 不加抗CK-MM血清时样品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性：50％CK-MB的活性； 加入抗CK-MM血清时样品的CK活性×2：CK-MB活性； 所测CK-MM和CK-MB之总活性－CK-MB活性＝CK-MM活性。 (四)动力学分析法 1．底物特异性分析法 2．抑制剂分析法 3．pH分析法 4．热失活分析法 (五)蛋白酶水解法 第三节 常用酶及同工酶测定的临床应用 一、血清酶 血清酶活性升高的原因： ●组织器官受损造成细胞破坏或细胞膜通透性增高，细胞内的某些酶大量释放入血； ●细胞的转换率增高或细胞的增殖加快，其特异的标志酶释放入血； ●细胞内酶的合成或诱导增强； ●酶的清除受阻。 * 诊 断 酶 学 临床生物化学检验 林孟戈 本章学习过程中请你思考: 1、酶学分析中工具酶参与的指示反应有哪些？ 2、血清酶活性浓度的测定技术有哪些？ 3、同工酶及其亚型的测定有哪些方法？ 4、临床常用血清酶测定有何临床意义？ 5、连续监测法测定酶活性浓度的原理和应用。 第一节 概 述 （一）酶的组成、结构和功能 ● 酶的本质---绝大部分的酶是蛋白质，有些酶是核酸 和酶蛋白组成的复合体，极少数酶的本质是核酸。 ● 酶的特性---极高的催化效率、高度的特异性 (specificity)以及催化作用的可调节性 一、酶的概念与特征 酶的结构和功能 ● 酶是蛋白质，具有一、二、三级结构，有些酶还具 有四级结构。 ● 单体酶(monomeric enzyme)---只由一条多肽链构成 ● 寡聚酶 (oligomeric enzyme)---由多个相同或不同 亚基以非共价键连接的酶 ● 多酶体系(multienzyme system)---由几种不同功能 的酶彼此聚合而成的多酶复合物 ● 酶的必需基团(essential group)---与酶的活性密 切相关的基团 ● 酶的活性中心(active center)---组成具有能与底 物结合并起催化反应的特定空间结构区域 （二）酶的催化作用机制 ●酶主要通过与底物形成一种或多种中 间复合物来降低反应的活化能。 ●在酶促反应中，酶与底物结合时，底物首先和酶分子上的活性中心相结合，形成酶－底物中间复合物（ES），降低反应的活化能，显著提高了反应速度。 （三）酶的命名、分类与编号 ● 酶的命名---习惯命名法、系统命名法 ● 酶的分类---可分为六大类 氧化还原酶(oxido-reductases)、转移酶(transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂合酶)(lyases)、异构酶(isomerases)、合成酶(或连接酶)(synthetases或ligases) ● 酶的编号---用4个数字加以系统编号 第一个数字表示酶的类别，第二个表示亚类， 第三个表示亚-亚类，第四个表示酶的编号序数。 ● 酶的命名---习惯命名法、系统命名法 （四）酶分类与编号