血型的鉴定方法及操作汇编.ppt

结果判断 注意事项（一）： 标准血清：健康壮年人混合血清，培养细胞株的单克隆抗体 要求： 高效价：抗A、抗B≥1：128 高亲和性：15s内出现凝集，3min后凝集块 1mm2 单克隆抗体具有检出A2，A2B的能力 冷凝集素效价 1：4 无菌，病毒灭活 注意事项（二）： 红细胞试剂：三个健康者同型新鲜红细胞混合，用生理盐水洗涤三次。 红细胞悬液不能过浓或过淡，5%生理盐水红细胞悬液 注意事项（三）： 所有器材清洁干燥 一般先加血清，后加红细胞 反应温度：IgM抗体反应最适温度为40C，为防止冷凝集素干扰，采用室温，370C反应减弱 离心时间和速度：3000g,30s 反定型不宜用玻片法 结果核对，避免笔误 正、反定型结果一致才能报告，否则查找原因 正反定型不一致的可能原因（一）： 操作技术上的错误：主要原因 离心过度或不足 细胞与血清反应比例不适当 阳性反应产生溶血现象而未能识别 漏加试剂、结果判读错误等 正反定型不一致的可能原因（二）： 出现假阴性的常见原因： 某些白血病患者和难治性贫血等导致ABO抗原减弱； 免疫系统尚未健全的新生儿、4月~6月内婴儿、抗体水平下降的老人； 亚型红细胞抗原性弱，难以检出； 低丙种球蛋白血症患者，血清定型时不凝集或弱凝集。 正反定型不一致的可能原因（三） 出现假阳性的常见原因： 红细胞出现多凝集现象； 严重肠道革兰氏阴性杆菌感染，可使红细胞获得类B现象； 异常的血浆蛋白升高、白蛋白/球蛋白异常，高浓度纤维蛋白原造成假凝集现象； 待检血清中有不规则抗体存在； 右旋糖酐、静脉注射某些造影剂等引起红细胞 类似凝集。 方法学评价 简单，灵敏度低，只适合IgM抗体 试管法：需时短，离心增强凝集，可发现亚型和较弱的反应，正、反定型皆适合 玻片法：适合大规模血型普查，反应时间长，有时漏掉弱反应，反定型不适合。 2.酶介质法（enzymic medium test）： 原理和方法：主要用于Rh血型鉴定（IgG抗体） 蛋白水解酶 增强IgG抗体的凝集作用 注意事项： Rh血型不需作反定型 每次实验均需作阳性、阴性对照 方法学评价 简单经济 稳定性、准确性较差，不能检出MN、Duffy血型系统 3.抗人球蛋白实验（Coomb’s test） 原理和方法 抗IgG 待测红细胞 + 抗RhD（IgG） + 抗人球蛋白 红细胞凝集 应用延伸： 检测红细胞同种抗体的经典方法，新生儿溶血、病、溶血性输血反应、自身免疫性溶血性贫血 直接Coomb’s（direct antiglobulin test, DAT） 间接Coomb’s（indirect antiglobulin test, IDAT） DAT：检查红细胞是否致敏 IDAT：检测血清中不完全抗体 4.聚凝胺介质法（polybrene test） 原理和方法 低离子强度盐溶液（low ionic strength salt solution, LISS)：降低介质离子强度，增加抗原抗体结合 聚凝胺：中和红细胞表面负电荷，使红细胞发生非特异性凝集。 重悬液（resuspension) 方法学评价 适于各类抗体（IgM，IgG） 快速、灵敏、可靠 对检测Kell血型系统抗体不理想，不能用肝素抗凝。 5.微柱凝胶法(gel cards with microtubes) 1986年法国人Dr. Yves Lappierre发明 1994年，获美国FDA认证 原理和方法 葡聚糖做成微型凝胶柱，上端为反应室，下端凝胶柱为抗原抗体凝集反应的介质。 抗原与抗体结合后离心，经过凝胶分子筛作用，游离红细胞在凝胶底部，而与抗体结合凝集的红细胞位于凝胶上部或悬浮于凝胶中。 反应室 凝胶柱 结果判读： 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中，和（或）出现溶血。 注意事项： 专用水平离心机 假阳性：镰型红细胞、巨幼红细胞 白细胞过多 纤维蛋白原未完全去除 细菌污染，血浆蛋白异常 假阴性：抗原抗体比例不合适 不适用于直接Coombs阳性的红细胞标本、酶处理的红细胞标本 方法学评价 灵敏度和准确性高，实验结果重复性好，可长时间保存 自动化程度高，实验过程标准化，ISO9000/CE认证 成本高  应用延伸：用于ABO正反定型，交叉配血、其他血型抗原检测（CcEe）、不规则抗体检测、Coombs实验 凝胶柱 中性胶 抗人球蛋白胶 特异性胶 三、交叉配血（cross matchin