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培养细胞总RNA试剂盒说明书 产品组成 NA试剂盒次制备核酸纯化柱 Buffer LT Buffer WA（浓缩液） Buffer WB（浓缩液） RNase-Free Water 说明书 50套 32 ml 12 ml 9.5 ml 2 ml×3 1份 ℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。 技术支持 杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail: technical@, 电话：400-0099-857。 产品介绍 本产品适合从中分离纯化NA。经后NA，补加乙醇后加入纯化柱，的蛋白与PCR抑制物则过滤除去NA经洗涤后，用RNase-Free Water洗脱，即可用于各种分子生物学实验。 用户需自备的试剂与物品 14.3 M β-β-mercaptoethanol）、无水乙醇 RNase-free 1.5ml离心管 移液器及吸头（为避免的污染，选用含有滤芯的移液器吸头） 一次性手套及防护用品和纸巾 台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子） 水浴锅和旋涡震荡器 使用前准备 如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。 μl 14.3 M β-巯基乙醇，混合均匀。加入β-巯基乙醇的Buffer RLT一个月内使用不影响实验结果。 根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WA和Buffer WB中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。操作步骤： 1. 在1.5 ml离心管中收集≤1×107 培养细胞，用手指轻弹管壁，使细胞分散开来。 *细胞收集方法： a 悬浮培养的细胞：300×g离心5分钟收集约1×107 培养细胞，弃上清液。 b 贴壁培养的细胞：弃培养上清，用胰酶消化并悬浮细胞，300×g离心5分钟收集约1×107 培养细胞，弃胰酶上清液。 c 细胞培养板中单孔培养的细胞（如果单孔细胞数≤1×105时，请选用微量细胞/组织总RNA纯化试剂盒：Cat. No.: 座机电话号码 ：弃培养上清，直接加入600 μl 已经加入了β-巯基乙醇的Buffer RLT，并用吸头来回吸注数次细胞使细胞溶解，直接进入步骤3操作。 2. 加入μl已经加入了β-巯基乙醇的Buffer RLT，旋涡振荡。* 勿使用过多的细胞，否则可能堵塞过滤柱并导致最后纯化的RNA基因组DNA污染严重。 3. 将细胞溶解物全部转移到过滤柱中，盖上管盖，13000 rpm 离心* 勿省略本步骤，否则可能导致后续的操作步骤中堵塞纯化柱。 * 如果此步骤有液体过滤不尽，则说明使用了过多的细胞。在步骤4可加入与滤液等体积的70%乙醇继续操作，其他步骤不变。 4．弃过滤柱，向滤液中加入600 μl 70％乙醇并用吸头吸注6~8次混合均匀，吸取600 μl混合液加入到核酸纯化柱中，盖上管盖，13000 rpm 离心5. 弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，13000 rpm 离心* 滤液无须彻底弃尽，避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染2ml 离心管在纸巾上倒扣拍击一次。6. 弃2ml 离心管中的滤液，在核酸纯化柱中加入500 μl Buffer WA, 盖上管盖，1000 rpm 离心。 * 确认在Buffer WA中已经加入无水乙醇。. 弃2ml 离心管中的滤液，在核酸纯化柱中加入00 μl Buffer WBR, 盖上管盖，1000 rpm 离心。 * 确认在Buffer WB中已经加入无水乙醇。 . 弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，14000 rpm 离心1分钟。* 如果离心机的离心速度达不到14000 rpm，则用最高速离心2分钟。 * 请勿省略该步骤，否则可能因所纯化的核酸中混有乙醇而影响后续的PCR效果。. 弃2ml 离心管，将核酸纯化柱置于一个洁净的1.5ml离心管中，在纯化柱的膜中央加入0~100 μl RNase-Free Water，盖上管盖，室温静置1分钟，12000 rpm 离心30秒。 * 如果离心机没有防泄漏的盖子，请将000 rpm 离心，以免管盖脱落而损伤离心机。10. 弃纯化柱，洗脱的NA可立即用于各种分子生物学实验；或者将NA储存于-0℃备用* 即使电泳检测可能观察不到DNA条带，也不代表纯化的RNA中不含DNA的污染，如需要彻底除去DNA，请用DNase I 消化残留的DNA。 杭州新景生物试剂开发有限公司区 地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F 邮编：310030 电话：座机电话号码 传真：座机电话号码 仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。 Ver.2