总糖和还原糖的测定改2.ppt

实验一:总糖和还原糖的测定 ——3,5二硝基水杨酸(DNS)法 目 的 掌握还原糖和总糖的测定原理 掌握分光光度计的使用 原 理 还原糖：指含有自由醛基或酮基的糖类 单糖: 不能被水解成更小分子的糖,单糖都是还原糖 Glc, Fru 寡糖: 最重要的是双糖：Maltose ,Sucrose, Lactose 但Sucrose不是还原糖 多糖: 能水解成多个单糖分子,如淀粉,糖原和纤 维素 测定方法－比色法 首先要制作葡萄糖标准曲线，以标准葡萄糖为样品进行测定，以葡萄糖含量（㎎）为横坐标， OD540读数为纵坐 标，绘制标准曲线。 然后待测样品的OD540平均值在标准曲线上查出相应的糖含量 朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律 　　朗伯－比尔定律是比色分析的基本原理，这个定律是有色溶液对单色光的吸收程度与溶液及液层厚度间的定量关系。此定律是由朗伯定律和比尔定律归纳而得。 A或D=㏒I0/I A或D＝光吸收或光密度 I0 ＝入射光强度 I ＝透射光强度 试剂和器材 试剂： 3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂 ； 葡萄糖标准溶液 ； 6M HCl；碘－碘化钾溶液； 6M NaOH；0.1% 酚酞指示剂。 器材 容量瓶,试管,移液管， 量筒，50℃水浴,沸水浴， 漏斗，胶头滴管,分光光度计等。 操作步骤： 1.葡萄糖标准曲线制作 2.样品中还原糖的提取： 藕粉测还原糖,50℃水浴20min浸出； 水浴锅中进行 3.样品总糖的水解及提取 玉米淀粉测总糖,沸水浴30min酸水解；电磁炉中进行 4.样品中含糖量的测定 注意事项 1.实验安全:强酸,强碱 2.藕粉改为称1.0克 3.总糖的水解及提取两次定容,中和至微红色 4.先把样品用封口膜混匀后测定OD540值, 5.标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色 移液枪的使用方法 移液器的使用手法，两档位 分光光度计的使用 1.机器电源打开，用波长设置键，设置所需的分析波长，预热20分钟； 2.比色皿有光面和毛面，手接触毛面； 3.待测液倒至比色皿3/4高度，切忌太满！ 4.空白对照放在比色皿槽的第一槽位；测定时浓度由低到高； 5.将空白对照推（拉 )入光路中，按100%T键，此时显示器显示的“BLA—”直至显示“100.0”为止。 6.将被测样品推（拉）入光路，这时便可从显示器上得到被测样品的透射比或吸光度值。样品读数三遍，取平均值。 7.使用分光光度计时带测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。 实验用水是教室后面的纯净水 值日生:每间教室1、2组 比色时为什么要设计空白管？ 比较费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的结果，这两种方法各有何优点？ 通 知 下一次实验“维生素C的定量测定”，本次为开放性实验，实验主题由各组自己拟定，可以以温度为主题，也可以以浸泡时间为主题，等等……请大家自己设计主题，可以自己准备好各种水果，蔬菜，实验室提供卷心菜和桔子。 * * 酸水解法使没有还原性的双糖与多糖,彻底水解成具有还原性的单糖,再进行测定,这样就可以求样品中总糖的含量。 黄色 棕红色 材料 藕粉，玉米淀粉。 移液器量程的调节 吸液 放液 去枪头的方法 思考题