04 基因诊断幻灯片.pptVIP

李 凌 References 《医学分子生物学》（七年制统编教材） 冯作化 主编 人民卫生出版社 《医学分子细胞生物学》（面向21世纪课程教材） 邓耀祖 屈伸 主编 科学出版社，2002 基因变异致病 疾病——基因变异： （1）内源基因的变异： 基因结构突变 基因表达异常 （2）外源基因的入侵 基因诊断 一、基因诊断概述 二、常用技术与方法 三、应用 一、基因诊断概述 (一) 基因诊断的概念与特点 (二) 基因诊断的基本原理与临床意义 (一)基因诊断的概念与特点 1．概念： 指利用现代分子生物学和分子遗传学方法，通过检测基因的结构或表达功能的异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。 基因诊断以DNA和RNA为诊断材料， DNA诊断 RNA诊断 Molecular Diagnosis Targets DNA Gene diagnosis RNA Protein: enzyme, Ag, marker 2．基因诊断的特点： （1）直接检测基因，属病因诊断，针对性强； （2）特异性强、灵敏度高：由于基因诊断采用核酸分子杂交、聚合酶链反应等技术； （3）适用范围广：其应用的范围已从原先局限的遗传性疾病扩大到感染性疾病、肿瘤、心血管疾病等领域。 基因诊断的评价 特异性 灵敏度 重复性 快速 经济 (二)基因诊断的基本原理与临床意义 1．基本原理： 通过检测致病基因（包括内源基因与外源基因）的存在、量的多少，结构变化与否及表达水平是否正常，以确定被检查者是否存在基因水平的异常变化，以此作为疾病确诊的依据。 2．临床意义: 对有表型出现的疾病作出明确诊断 早期快速诊断 确定个体对疾病的易感性 疾病的分期分型、疗效监测、预后判断等 二、基因诊断的常用技术与方法 (一) 基因诊断的常用技术 (二) 基因诊断的基本方法 (一)基因诊断常用技术 核酸分子杂交 PCR（聚合酶链式反应） 限制性酶切分析 SSCP（单链构象多态性分析） DNA 测序 DNA 芯片技术 基因诊断技术分类 Molecular hybridization Southern, Northern, slot blot, FISH, ASO, microarray PCR PCR/ASO, PCR/SSCP, PCR/sequencing, PCR/RFLP Targets and Molecular Techniques DNA Southern blot, FISH,PCR, Sequencing, microarray, restriction analysis, RFLP，SSCP RNA Northern blot, RT-PCR, microarrays Protein Western blot, Immuno-histochemistry, microarray Basic Principle 1. 核酸分子杂交Molecular hybridization Southern blot——DNA Northern blot——RNA Dot blot，Slot blot In Situ Hybridization, FISH 核酸分子杂交的流程示意图 待测核酸制备 探针的种类 基因组DNA 探针 cDNA探针 寡核苷酸探针(Oligonucleotide probes) RNA 探针 探针的标记物 放射性标记物 32P，35S，125I，3H 非放射性标记物 生物素，地高辛，荧光素， 酶， 金属 探针的标记方法 放射性同位素标记法 缺口平移法(Nick translation) 随机引物延伸法(Random primer labelling) 末端标记法(End labelling) 非放射性标记法 酶促标记法、化学标记法 Southern blot 2、PCR PCR技术的优点 特异性强 灵敏度高 操作简单、省时 对待检原始材料质量要求低 高效率的基因扩增技术 PCR引物设计的一般原则 引物长度 G+C含量 碱基分布的随机性 引物自身 引物之间 引物的3’端 引物的5’端