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第一节 细胞形态结构的观察方法 一、光学显微镜技术 1、普通复式光学显微镜技术 普通光学显微镜（最大分辨率为0.2μm ) 显微镜的性能优劣决定于它的分辨率。分辨率是指显微镜区分开相近两点的能力。 2、荧光显微镜技术 在紫外光显微镜基础上发展而来，利用样品自发荧光和诱发荧光，可以对某些生物大分子进行定性和定位研究。不仅可以观察固定切片标本，还可以在活体染色后对活细胞进行研究。 3、相差显微镜技术 光线在通过密度不同的介质时，其滞留程度不同，即产生了光程差和相位差。相差显微镜的基本原理把光程差变成振幅差(即明暗)。从而提高样品反差，故样品不需染色，适合观察活细胞。甚至研究细胞核、线粒体等细胞器的动态。它在结构上与普通显微镜最大的不同是在物镜后装有相差板。 二、电了显微镜技术 （一）电了显微镜基本知识 分辨率最终决定于光的波长，由于使用电子束作光源，电镜的分辨率大大提高。电镜的分辨率常常是超薄切片厚度的1/10，它的分辨率可达0.2nm，其放大倍数为106倍。 三、扫描隧道显微镜(STM) 是一种探测微观世界物质表面形貌的仪器，在纳米生物学的研究领域具有独特的优越性。 STM的特点：①具有原子尺度的高分辨本领；②可在真空、大气、液体等条件下工作；③非破坏性测量。 细胞成分分析和形态学观察相结合，可揭示生物大分子在细胞内的构建及功能。 用超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物 利用多种方法使细胞崩解，形成细胞器和细胞组分的混合匀浆，再通过差速离心，即利用不同的离心速度所产生的不同离心力，将各种亚细胞组分和各种颗粒分开。 差速离心与密度离心相结合可以达到精确的分离。 细胞内特异核酸的定位与定性 原位杂交技术 用标记的核酸探针通过分子杂交确定特殊核苷酸序列在染色体上或细胞中的位置的方法 利用放射性标记技术 研究生物大分子在细胞内的合成动态 放射自显影技术包括两个主要步骤：即同位素标记的大分子前体的掺入和细胞内同位素所在位置的显示。 定量细胞化学分析技术 1、显微分光光度测定技术 根据细胞内某些物质对光谱吸收的原理，来测定这些物质（如核酸与蛋白质等）在细胞内的含量。 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 一、细胞培养 细胞培养就是将动植物组织或细胞从机体取出，分散成单个细胞或直接以单细胞生物，给予必要的生长条件，让其在培养瓶中或培养基上继续生长与增殖。 （一）动物细胞培养 从机体取出立即培养的细胞叫原代细胞。适应在培养条件下持续传代培养的细胞为传代细胞。 通过纯系化或选 择法从原代培养细胞中分离出来的细胞群体叫细胞株，细胞分裂周期约限于50—60次。 从原代细胞或细胞株中获得的可无限传代的细胞叫细胞系。 （二）植物细胞培养 单倍体细胞培养。 原生质体培养：去壁的植物细胞叫原生质体。可培养成植株或体细胞杂交植株。 二、细胞工程 应用细胞生物学方法，按照预先的设计，有计划地改变或创造细胞遗传物质的技术以及发展这种技术 的领域为细胞工程。 细胞工程所使用的技术主要是细胞培养、细胞分化的定向诱导、细胞融合和显微注射等。 （一）细胞融合与细胞杂交技术 真核生物的体细胞经过培养，两个或多个细胞融 合成一个双核或多核细胞的过程叫细胞融合。 动物细胞融合一般要用灭活的病毒(如仙台病毒)或化学物质(如聚乙二醇，即PEG）介导；植物细胞事例时，要用纤维素酶去掉纤维素壁。 20世纪80年代又发明了电融合技术。 细胞融合可以在基因型相同的细胞间进行，也可以在基因型不同的种内细胞间甚至种间细胞间进行。 （二）单克隆抗体技术 1975年英国学者Milestein等开创了将产生抗体的单个细胞同瘤细胞杂交的技术。他们的设计是经绵羊红细胞免过的小鼠脾细胞(B淋巴细胞)与骨髓瘤细胞融合，融合的杂交瘤具有两种亲本细胞的特性即可分泌抗绵 羊红细胞的抗体，又可无限增殖。学者们纷纷利用这一技术来制备针对不同抗原的高度纯一的单克隆抗体。单克隆抗体就是单个杂交瘤细胞 增殖产生的克隆细胞群分泌的高度纯一的抗体。 （三）细胞拆合与显微操作技术 细胞拆合就是把细胞核与质分离开后将不同来源的细胞质与细胞核相互配合，形成核质杂交细胞。 第四章 细胞膜与细胞表面 第一节 细胞膜与细胞表面特化结构 细胞膜又称质膜，是围绕在细胞最外层，由膜脂和膜蛋白构成。 一、细胞膜的结构模型 1925年Gorter等人提出质膜由双层脂分子构成。 1935年Danielli和Davson提出三夹板模型。 1972年Singer和