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4.菊糖发酵试验 【原理】大多数肺炎链球菌可以分解菊糖，菊糖发酵产酸，指示剂呈酸性反应，发酵管由黄色变为紫红色。 【操作】细菌分别接种菊糖发酵管，经37℃孵育18-24h观察结果。 【结果】用以区分肺炎链球菌和甲型链球菌，肺炎链球菌为阳性，甲型链球菌为阴性。 实验内容三 生化反应鉴定 5.胆汁溶菌试验 【原理】肺炎链球菌可产生一种自溶酶，胆盐能活化 自溶酶，加速自溶过程，引起细胞自溶。 【操作】 胆汁溶菌试验可用以区分甲型链球菌和肺炎链球菌 实验内容三 生化反应鉴定 37℃，24 h + 胆盐（0.1 ml） 37℃，0.5 h 【结果】液体由混浊变透明为阳性，肺炎链球菌为阳性，甲型链球菌为阴性。 【意义】 接种细菌 【注意事项】 无菌操作 挑取细菌培养平板上的单个菌落进行生化鉴定。 实验内容三 生化反应鉴定 本次课实验操作内容 1.5株细菌的菌落特征观察 2.5株细菌的革兰染色 3.5株细菌的生化反应鉴定 触酶试验 血浆凝固酶 甘露醇发酵试验 菊糖发酵试验 胆汁溶菌试验 5种球菌的主要生物学性状 鉴别要点 革兰染色 触酶 1号 2号 3号 4号 5号 血浆凝固酶 胆汁溶菌试验 颜色 溶血 菌落特征 生化反应 结 论 甘露醇发酵试验 菊糖发酵试验 重要的生化试验 触酶试验可区分葡萄球菌和链球菌。 血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验是区分致病性和非致病性葡萄球菌。 胆汁溶菌试验可区分甲型链球菌和肺炎链球菌。 小 结 葡萄球菌属和链球菌属的主要菌落特征？ 区分葡萄球菌属和链球菌属的主要生化反应是什么？ 区分肺炎链球菌和甲型链球菌的生化反应是什么？ 复习思考题 临床微生物学和微生物检验 实验三 球菌的培养和鉴定III 教 员： 顾 江 单 位： 临床微生物学教研室 E-mail: jianggu2012@163.com 球菌的检验程序 标本 直接检查 （涂片、染色、镜检） 分离培养 可疑菌落 菌落特点 鉴定试验 第一次 第二次 生化结果观察 荚膜染色 结果讨论与分析 第三次 形态、色素、溶血 血浆凝固酶、触酶、菊糖发酵、 甘露醇发酵、胆汁溶菌、 小白鼠毒力试验 本次课实验内容 生化结果观察 荚膜染色 结果讨论与分析 教学目标与要求 了解： 脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的形态和染色特性 理解： 葡萄球菌属和链球菌属的主要生化反应原理 掌握： 1.葡萄球菌属、链球菌属的检验程序 2.葡萄球菌属、链球菌属的分离培养与鉴定方法 重点与难点 重点： 葡萄球菌属、链球菌属的检验程序和鉴定方法 难点： 葡萄球菌属、链球菌属的鉴别要点 标本 5株待测细菌 （金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型链球菌、甲型链球菌、肺炎链球菌） 实验动物 感染肺炎链球菌的小白鼠 试剂 结晶紫染液，20%硫酸铜溶液 器材 接种环、载玻片、酒精灯、显微镜等 实验器材 甘露醇发酵试验 菊糖发酵试验 实验内容一 生化反应结果观察 1. 甘露醇发酵试验 【操作】观察第二次课接种的甘露醇发酵生化管的颜色变化，致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶类，能发酵甘露醇产酸，培养基由紫色变为黄色为阳性。 【结果】金黄色葡萄球菌为阳性，表皮葡萄球菌为阴性 血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性和非致病性葡萄球菌 实验内容一 生化反应结果观察 2.菊糖发酵试验 【操作】观察第二次课接种的菊糖发酵试验生化管的颜色变化，大多数肺炎双球菌可以分解菊糖，菊糖发酵产酸，指示剂呈酸性反应，发酵管由黄色变为紫红色为阳性。 【结果】用以区分肺炎链球菌和甲型链球菌，肺炎链球菌为阳性，甲型链球菌为阴性。 实验内容一 生化反应结果观察 实验内容二 荚膜染色 产气荚膜杆菌 脑膜炎双球菌 细菌的特殊结构： 实验内容二 荚膜染色 【实验原理】 荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质。由于荚膜与染料的亲和力弱，不容易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法(负染色法)染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，从而在菌体周围形成一透明圈。 实验内容二 荚膜染色 【操作步骤】 制片：解剖肺炎链球菌感染的小鼠，用棉签蘸取腹腔液印片，空气自然干燥，无需加热固定。 细菌涂片 硫酸铜清洗 不同于革兰染色 荚膜染色 结晶紫 滴加染液 轻微加热 染色5~7min 不能用水洗 不能加热固定 冒白气，染液量稍多 【实验结果】 菌体紫色，荚膜淡紫色 实验内容二 荚膜染色 【注意事项】 不加热固定 标本经染色后不可用水洗，必须用20% CuSO4冲洗。 实验内容二 荚膜染色 本次课实验操作内容 观察记录5种球菌的生化反