长期毒性试验学案.ppt

实验动物与动物实验—— 第2讲 长期毒性试验 № 2. Chronic Toxicity Test  * * 一、长期毒性试验的目的意义 确定毒性剂量： Toxic dosage 发现安全范围： Safety margin 研究毒性反应： Toxic reaction: 性质、程度、量毒关系、产生时间，达峰时间, 持续时间及反复产生毒性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性 找到毒性反应靶器官： Target organ 明确毒性反应是否可逆： Reversibility ————确定“DOSTR” 二、长期毒性试验的基本内容和要求 1.试验动物 二种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬(Beagle犬), 必要时用猴； 动物应写明供应单位信息，品系及生产合格证号； 大鼠6-8周龄，体重差异不超过平均体重的20％。3个月以上可选5-6周龄大鼠； Beagle犬4-12月龄； ♂♀各半，数量相同 。或选用敏感性别的动物 2.饲养管理 严格控制环境条件，避免不必要的干扰因素。 室内温度 饲料或饲料配方 湿 度 光 照 通风条件 饮水质量 环境因素 2.饲养管理 啮齿类动物 适宜温度为 18~27 ℃ 。 相对湿度为 40%~70%。 光照宜持续 12 小时明亮，12 小时黑暗。 通风条件良好。 所用饲料应符合动物的营养标准。 雌雄动物应分开饲养，每笼不宜超过 5只 犬 单笼饲养，定量喂食。 Beagle 狗实验前至少驯养 1~2 周; 杂种狗应先检疫，驱虫。 2.饲养管理 主要因素 动物类别 小鼠、大鼠 豚鼠、家兔 犬 温度(℃ ) 20-26 18-28 18-28 湿 度 40-60% 40-60% 40-60% 换气次数 10-15次/h 10-15次/h 10-15次/h 气流速度 13-18cm/s 13-18cm/s 13-18cm/s 压 力 正 压 正 压 负 压 洁 净 度 100000级 100000级 落下细菌 ＜＝3个/皿 ＜＝3个/皿 照 明 150-300 Lux 150-300 Lux 噪 声 ＜60 db ＜60 db 臭 气 氨浓度＜20 ppm 氨浓度＜20 ppm 3.受试物 受试物应能充分代表临床试验受试物和上市药品； 因此受试物应采用制备工艺稳定、符合临床试用质量标准规定的样品； 一般用中试样品，并注明受试物的名称、来源、批号含量（或规格） 、保存条件及配制方法等。 4.给药途径 与临床给药途径一致 混入饲料或饮水中灌服时： 保证受试药分布均匀 在配制饲料或溶于饮水后仍旧稳定 计量准确 临床iv 时, 大鼠给药周期＞1月，可用ip代替，im或sc应变换注射部位 必要时改变给药途径 5.剂量及分组 至少3个给药组, 单位: mg(ml,IU) /kg 或 /m2 以不等浓度等容量给药 低剂量组--高于有效剂量，不出现毒性反应(一般为动物有效剂量或临床治疗量的2~3倍) 中剂量组（1-n个）--产生轻微或中等度毒性反应 高剂量组--产生明显或严重的毒性反应，或个 别动物死亡（但死亡率应控制在 20% 以内）； 空白对照--溶媒或其它赋形剂，若溶媒或赋形剂有毒性时则增加正常对照组 3月，大鼠♂♀各20只/组 ≥3月，大鼠♂♀各30只/组 大动物6-8只/组（♂♀各半） 按 计算 5.剂量及分组 在选择合适的剂量时还应考虑到： ①药物在体内的生物蓄积作用。对于高蓄积性药物应适当减少其剂量，否则在长期毒性试验结束时各剂量均有可能出现毒性作用； ②药物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增毒”，而这些酶又是否易被药物本身所诱导或抑制。 ③药物在消化道中的稳定性。与胃肠道内容物有亲和性的药物，则应酌情增加剂量。 可供参考的具体方法 （1）半数致死量法（LD50法） （2）短期蓄积试验过渡法 （3）药代动力学法（MBS法） （4）最大耐受量法（MTD法） （5）临床拟用剂量法（ACD法） （6）等效剂量法 5.剂量及分组 大鼠3个月:采用约LD50的1/10、1/50和1/100剂量，狗各剂量组可采用一半剂量。 根据药代动力学最大有效安全浓度（MCD） 大鼠3个月:采用大鼠的1.0 、3.3~6.6 和10~20 MCD; 狗可采用大鼠一半左右的剂量。 根据